Estudo de carrapatos associados com aves no entorno do tinguá, Nova Iguaçu, Rio de Janeiro, Brasil; detecção de Rickettsia spp., e o desenvolvimento de métodos moleculares para análise de interações carrapato-microrganismo

Abstract

Carrapatos parasitos de aves silvestres podem servir como vetores deagentes patogênicos de grande importância para a saúde silvestre e coletiva. Assim, o presente estudo analisou a prevalência e intensidade de infestação de carrapatos em aves silvestres capturadas em três regiões de Mata Atlântica, com diferentes níveis de antropização, situada em Nova Iguaçu, estado do Rio de Janeiro, Brasil, com o objetivo de avaliar a relação entre a prevalência de infestação e áreas preservadas na região. As capturas foram realizadas no período de maio de 2011 a abril de 2012 onde foram capturadas 625 aves representadas por 98 espécies divididas em 26 famílias e sete ordens, totalizando 14,2% da riqueza das espécies de aves do estado. O total de 17,44% (n=109; 109/625) das aves capturadas estavam parasitadas por 458 carrapatos, sendo 88,2% (n=404; 404/458) no estágio de larva (LL) e 11,8% (n=54; 54/458) no estágio de ninfa. Dentre os ixodídeos coletados, 99% (n=453) eram do gênero Amblyomma: Amblyomma longirostre (LL= 345; NN= 34), Amblyomma nodosum (NN= 13), Amblyomma calcaratum (NN= 3), Amblyomma varium (NN= 2); Amblyomma coelebs (NN=1), Amblyomma naponense (LL= 1), Amblyomma ovale (LL=1) e Amblyomma sp. (LL= 53). O gênero Haemaphysalis sp. foi representado por quatro larvas e uma única ninfa, correspondendo a 1% dos carrapatos coletados. Além disso, foram relatadas novas espécies de aves hospedeiras no Brasil, o caso inédito de superinfestação por A. longirostre em Xiphorhynchus guttatus. Análises moleculares (sequenciamento do gene mitocondrial 16S DNAr), permitiram a validação da identificação morfológica ao nível de espécie de larvas de A. longirostre sem a necessidade de aplicação de métodos de clarificação comumente utilizados. A detecção e identificação de agentes patogênicos e de seus hospedeiros carrapatos dependem cada vez mais de métodos moleculares, que tem por princípio a extração do DNA do carrapato e do microrganismo abrigado por ele. Na tentativa de estandardização da extração do DNA de ixodídeos e de sua microbiota associada, o presente estudo comparou seis métodos de extração de DNA (Fervura em água estéril, InstaGene®, QIAamp® DNA Mini Kit, Fenol:clorofórmio, Terra de diatomácea e Hotshot modificado). Até o momento, amostras submetidas à extração com Kit e Fenol:clorofórmio apresentam melhores resultados (em termos de quantidade e qualidade do DNA extraído) quando comparado aos outros métodos. Análise in silico de sequências que codificam os genes gltA , htrA e ompB de carrapatos associados à espécies de rickettsias revelaram ser a base para um novo método de PCR-RFLP, que permitiu a identificação diferencial de espécies de Rickettsia encontradas no Brasil. O método foi avaliado utilizando larvas e ninfas de Amblyomma longirostre, Amblyomma ovale e Amblyomma varium coletadas nas aves capturadas neste estudo. A bactéria “Candidatus Rickettsia amblyommii” foi identificada em 100% (17/17) dos A. longirostre examinados, enquanto que as outras duas espécies de carrapatos foram universalmente PCR negativas. O método básico emprega as endonucleases de restrição MspI e Rsal e pode ser realizada no decurso de um único dia de trabalho. Este oferece um meio conveniente e rentável para executar a análise em grande escala de populações de carrapatos, e deve ser um benefício para os pesquisadores que não dispõem de recursos financeiros ou técnicos necessários para a identificação baseada no sequenciamento de nucleotídeos. Em conclusão, este estudo amplia o conhecimento das relações ecológicas entre ixodídeos e a avifauna em um importante bioma da região Neotropical, com novas perspectivas no âmbito das técnicas moleculares aplicadas a inquéritos de parasitismo que envolve carrapatos parasitos de aves silvestres