Please use this identifier to cite or link to this item: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9819
Tipo do documento: Tese
Title: Utilização de marcadores fenogenotípicos de virulência na caracterização de Vibrio spp. isolados a partir de mexilhões (Perna perna) em diferentes pontos do litoral do Rio de Janeiro
Other Titles: Use of virulence fenotipic and genotipic markers in the characterization of Vibrio spp. isolated from mussels (Perna perna) from different parts of Rio de Janeiro coast.
Authors: Oliva, Marcelo Santos de
Orientador(a): Souza, Miliane Moreira Soares de
Primeiro coorientador: Coelho, Shana de Mattos de Oliveira
Segundo coorientador: Rodriguez, Maria Claudia
Primeiro membro da banca: Rodrigues, Dália dos Prazeres
Segundo membro da banca: Ibañez, Fernando Julio
Terceiro membro da banca: Araújo, Fábio Vieira de
Quarto membro da banca: McIntosh, Douglas
Keywords: Aeromonas;Coliformes;Mexilhões;Mitilicultura;Saúde pública;Vibrio;Aeromonas;Coliforms;Mussel;Mussel culture;Public health;Vibrio
Área(s) do CNPq: Microbiologia
Idioma: por
Issue Date: 30-Nov-2012
Publisher: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciência, Tecnologia e Inovação em Agropecuária
Citation: OLIVA, Marcelo Santos de. Utilização de marcadores fenogenotípicos de virulência na caracterização de Vibrio spp. isolados a partir de mexilhões (Perna perna) em diferentes pontos do litoral do Rio de Janeiro. 2012. 82 f. Tese (Doutorado em Ciência, Tecnologia e Inovação em Agropecuária) - Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, 2012.
Abstract: Os mexilhões são moluscos bivalves filtradores que se alimentam de micro-organismos captados pela corrente de água e não filtram seletivamente o alimento, refletindo a qualidade microbiológica do habitat aquático. O trabalho objetivou caracterizar espécies bacterianas de importância em Saúde Pública associadas aos bivalves incrustados em costões rochosos próximos a cabos subaquáticos no Arquipélago de Santana em Macaé e em fazendas de maricultura em Angra dos Reis, Baía da Ilha Grande e Arraial do Cabo, no Estado do Rio de Janeiro. Associado a isso, o trabalho visou detectar o perfil de resistência antimicrobiana dos isolados bacterianos e os genes marcadores e de virulência a partir de Vibrio spp. Foi feita a caracterização pela detecção de gene alvo (rpoA) encontrado em todas as cepas de Vibrio, dos genes espécie específico (tlh e cth) e genes de virulência (tdh, trh e cth), e avaliada a água do mar quanto a possíveis contaminações decorrentes de atividades pesqueiras e subaquáticas. Foram feitas 7 coletas e obtidos 209 isolados de Vibrio spp., representados por Vibrio parahaemolyticus 40,66% (85/209), Vibrio alginolyticus 19,6% (41/209), Vibrio vulnificus 12,4% (26/209) e outras espécies 27,2% (57/209). Foram detectados 91,3% (191/209) de resistência à ampicilina, 23,9% (50/209) à ciprofloxacina, 18,6% (39/209) à nitrofurantoína, 5,7% (12/209) à tetraciclina, 4,3% (9/209) à pefloxacina e 3,3% (7/209) ao cloranfenicol. Todos os 209 isolados identificados fenotipicamente como Vibrio spp. amplificaram o gene rpoA, gerando fragmento de 242 pb. O gene tlh foi detectado em 40,6% (85/209) dos isolados de Vibrio spp., identificados como V. parahaemolyticus. Do total de 85 isolados de Vibrio parahaemolyticus, o gene tdh foi detectado em 68,2% (58/85) e o gene trh em nenhum isolado. O gene cth foi detectado em 12,5% (26/209) dos isolados, todos identificados fenotípicamente como V. vulnificus, amplificando um fragmento de 386 pb. A análise do sequenciamento genético em oito isolados de Vibrio spp. foi correlata com a identificação fenogenotípica em 50% (4/8). Nos isolados onde não foi estabelecida correlação (4/8) foram aplicados testes bioquímicos e identificação genotípica baseada em genes espécie-específicos. Em relação à detecção de enterobactérias, a partir das 7 coletas, foram obtidos 88 isolados, representados por 29,5% (26/88) de Escherichia coli, 10,2% (9/88) de Enterobacter agglomerans e Enterobacter cloacae, 9,1% (8/88) de Citrobacter diversus, 7,9% (7/88) de Enterobacter aerogenes, 5,7% (5/88) de Proteus vulgaris, 4,5% (4/88) de Serratia rubidae, Enterobacter sakazakii e Citrobacter freundii, 3,4% (3/88) de Hafnia alvei, 2,3% (2/88) de Serratia marcencens, Klebsiella oxytoca, Morganella morganii e Yersinia enterocolitica e 1,1% (1/88) de Proteus mirabilis. Foram detectados 64,7% (57/88) de resistência à ampicilina, 39,7% (35/88) à cefalotina, 30,7% (27/88) à gentamicina, 26,1% (23/88) à cefoxitina, 15,9% (14/88) à ceftriaxona e tetraciclina, 13,6% (12/88) ao cloranfenicol, 11,4% (10/88) à ciprofloxacina, 7,9% (7/88) à ampicilina-sulbactam e aztreonam e 1,1% (1/88) ao imipinem. A análise microbiológica da água do mar revelou a presença de coliformes termotolerantes em 50% (4/8) das amostras de Arraial do Cabo. Foram detectados 12 isolados de Aeromonas spp. A patogenicidade de algumas espécies bacterianas, aliada a resistência a antibióticos, torna importante a avaliação microbiológica dos mexilhões para monitorar estes organismos, para a segurança dos manipuladores e consumidores.
Abstract: Mussels are bivalve filtrating mollusks, which feed of microorganism uptaken from the water current, and it is not a selective mechanism, so mussels microbiological analysis shows up the aquatic environment quality. The objective of the study was to characterize the bacterial species of public health importance associated with bivalve mollusks incrustated in underwater cable and into the coastal rocks of Arquipélago de Santana, Macaé, and mariculture farms in Angra dos Reis of Ilha Grande and Arraial do Cabo, all in Rio de Janeiro State. Associated with this, the present study aimed to detect antimicrobial resistance profile of bacterial isolates and virulence markers and genes from Vibrio spp. Characterization was performed by detecting of target gene (rpoA), found in all strains of Vibrio, species specific genes (tlh and cth) and virulence genes (tdh, trh and cth). It was evaluated the water quality for possible contamination from fishing activities and underwater. Seven samples were taken and obtained a total of 209 strains of Vibrio spp., represented by Vibrio parahaemolyticus 40.66% (85/209), Vibrio alginolyticus 19.6% (41/209), Vibrio vulnificus 12.4% ( 26/209) and other species 27.2% (57/209). Was detected 91.3% (191/209) ampicillin resistance, 23.9% (50/209) to ciprofloxacin, 18.6% (39/209) to nitrofurantoin, 5.7% (12/209) to tetracycline, 4.3% (9/209) to pefloxacin and 3.3% (7/209) to chloramphenicol. All 209 isolates phenotypically identified as Vibrio spp. amplified rpoA gene, generating a fragment of 242 bp. The tlh gene was detected in 40.6% (85/209) of the isolated Vibrio spp., all phenotypically identified as V. parahaemolyticus. Among 85 strains of Vibrio parahaemolyticus, the tdh gene was detected in 68.2% (58/85), and the trh gene was not detected. The cth gene was detected in 12.5% (26/209) of isolates, all identified phenotypically as V. vulnificus, amplifying a fragment of 386 bp. The correlation between the fenotipic and genotypic identification of the Vibrio spp. strains with the sequencing data was obtained in 50% (4/8) of isolates. In isolates whithout correlation (4/8) biochemical assays and genotypic identification based on speciesspecific genes tests were applied to identify the isolates. The detection of Enterobacteriaceae achieved a total of 88 isolates, represented by 29.5% (26/88) of Escherichia coli, 10.2% (9/88) of Enterobacter agglomerans and Enterobacter cloacae, 9.1% (8/88) of Citrobacter diversus, 7.9% (7/88) of Enterobacter aerogenes, 5.7% (5/88) of Proteus vulgaris, 4.5% (4/88) of Serratia rubidae, Enterobacter sakazakii and Citrobacter freundii, 3.4% (3/88) of Hafnia alvei, 2.3% (2/88) of Serratia marcencens, Klebsiella oxytoca, Morganella morganii and Yersinia enterocolitica and 1.1% (1/88) of Proteus mirabilis. Also, it was detetecetd 64.7% (57/88) ampicillin resistance, 39.7% (35/88) to cephalothin, 30.7% (27/88) to gentamicin, 26.1% (23/88) to cefoxitin, 15.9% (14/88) to ceftriaxone and tetracycline, 13.6% (12/88) to chloramphenicol, 11.4% (10/88) to ciprofloxacin, 7.9% (7/88) to ampicillin and sulbactam, aztreonam, and 1.1% (1/88) to imipenem. Microbiological analysis of seawater revealed presence of coliforms in 50% (4/8) of samples from Arraial do Cabo. A total of 12 strains of Aeromonas spp. were detected. Due to intrinsic pathogenicity of some bacterial species, plus the antibiotics resistance, it is important the microbiological evaluation of mussels for their monitoring, ensuring the safety of handlers and consumers.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9819
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