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dc.contributor.authorChamba, Juan Sebastian Vera
dc.date.accessioned2023-12-22T01:39:40Z-
dc.date.available2023-12-22T01:39:40Z-
dc.date.issued2018-04-04
dc.identifier.citationCHAMBA, Juan Sebastian Vera. Caracterização dos transportadores OsNTR1.1A, OsNTR1.1B e OsNTR1.1C por meio da reversão fenotípica do mutante chl1-5 de Arabidopsis thaliana. 2018. 40 f. (Mestrado em Agronomia, Ciência do Solo) - Instituto de Agronomia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, 2018.por
dc.identifier.urihttps://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/10576-
dc.description.abstractA absorção de Nitrogênio (N) pelas plantas é uma etapa chave para a eficiência de uso de N, afetando a produção de massa fresca e rendimento de grãos. O transceptor NRT1.1 de Arabidopsis thaliana foi identificado como sinalizador da absorção de nitrato (NO3-). Em arroz, três prováveis ortólogos do transceptor NRT1.1 foram identificados, nomeados de OsNRT1.1A, OsNRT1.1B e OsNRT1.1C. O objetivo deste estudo foi avaliar se a superexpressão dos genes OsNRT1.1A, OsNRT1.1B e OsNRT1.1C em plantas mutantes chl1-5 de Arabidopsis thaliana (sem o gene NRT1.1) restabelecem a capacidade de transporte e sinalização pelo nitrato perdida no mutante nocauteado. O processo de transformação de plantas chl1-5 de A. thaliana foi mediante floral dip com as cepas de Agrobacterium tumefaciens da linhagem LBA4404 mediante as construções obtidas 35S:OsNRT1.1A:HA, 35S:OsNRT1.1B:HA, 35S:OsNRT1.1C:HA e 35S:OsNRT1.1sa:HA (promotor:gene:tag de HA). Posteriormente foi utilizado o antibiótico canamicina para obter as linhagens segregantes produto da transformação, sendo que apenas as plantas com duas cópias do gene foram selecionadas para testar os diferentes níveis de expressão gênica das plantas obtidas. Para verificar a resistência das plantas mutantes ao clorato (NaClO3), foi montado o experimento com plantas homozigotas, e suas sementes foram germinadas sobre substrato comercial e vermiculita, aos 23 dias após o plantio foram iniciadas aplicações com 12 mM de NaClO3. Para avaliar a expressão gênica alterada pela introdução de OsNRT1.1A, OsNRT1.1B ou OsNRT1.1C no mutante chl1-5, foram desenhados iniciadores para análise de expressão dos transportadores de NO3- de alta afinidade e baixa afinidade. Foram usadas duas linhagens de cada transformação nos experimentos, além de plantas tipo silvagem (WT) e plantas mutantes chl1-5. O teste com clorato mostrou a capacidade dos transportadores OsNRT1.1A, OsNRT1.1B ou OsNRT1.1C de absorver nitrato, evidenciado pelo decréscimo da massa fresca provocado pela redução do clorato a clorito pela nitrato redutase, produto tóxico para as células. A inserção do transportador OsNRT1.1B causou a maior redução de crescimento no teste do clorato em comparação com OsNRT1.1A e OsNRT1.1C, chegando aos mesmos níveis de redução do crescimento da planta tipo silvestre (WT). As análises de expressão mostraram que a inserção dos genes OsNRT1.1A, OsNRT1.1B e OsNRT1.1C em Arabidopsis thaliana chl1-5 foi capaz de induzir a expressão dos genes OsNRT2.1 e OsNAR2.1, sendo que a forma splicing alternativo de OsNRT1.1A (OsNRT1.1Asa) não afetou de maneira significativa a expressão de OsNRT2.1 e OsNAR2.1. Os resultados obtidos mostram a capacidade dos ortólogos de NRT1.1 em arroz (OsNRT1.1A, OsNRT1.1B e OsNRT1.1C) em absorver nitrato e sinalizar para a expressão de outros transportadores de nitrato (transceptor), podendo afetar a eficiência de absorção de nitrogênio.por
dc.description.sponsorshipCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpor
dc.description.sponsorshipCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológicopor
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal Rural do Rio de Janeiropor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectTransceptorpor
dc.subjectNitrogêniopor
dc.subjectOryza sativapor
dc.subjectArabidopsis thalianapor
dc.subjectTransceptoreng
dc.subjectNitrogeneng
dc.titleCaracterização dos transportadores OsNTR1.1A, OsNTR1.1B e OsNTR1.1C por meio da reversão fenotípica do mutante chl1-5 de Arabidopsis thalianapor
dc.title.alternativeCharacterization of the isoforms OsNTR1.1A, OsNTR1.1B and OsNTR1.1C transporters by phenotypic reversion of the chl1-5 mutant of Arabidopsiseng
dc.typeDissertaçãopor
dc.description.abstractOtherNitrogen (N) uptake by plants is a key step for N use efficiency, affecting fresh mass production and yield of grains. The NRT1.1 transceptor of Arabidopsis thaliana was identified as a molecular signal of nitrate uptake (NO3-). In rice, three orthologs of the NRT1.1 named OsNRT1.1A, OsNRT1.1B and OsNRT1.1C, were identified. The objective of this work was to evaluate the overexpression of the genes OsNRT1.1A, OsNRT1.1B and OsNRT1.1C in Arabidopsis thaliana chl1-5 mutant plants to restore the transport and signaling capacity of the nitrate lost in the knockout mutant. The transformation process of A. thaliana plants was obtained by floral immersion with strains of Agrobacterium tumefaciens of lineage LBA4404 by the following constructs 35S: OsNRT1.1A: HA, 35S: OsNRT1.1B: HA, 35S: OsNRT1. 1C: HA and 35S: OsNRT1.1sa: HA (promoter: gene: HA tag). Subsequently, the antibiotic kanamycin was used to obtain segregant lineages of the transformation product, being only plants with two copies of the gene was selected for testing the differents levels of gene expressing. To verify the resistance of the mutant plants to the chlorate (NaClO3), the experiment was set up with homozygous plants, and their seeds were germinated on commercial substrate and vermiculite. At 23 days after planting, applications with 12 mM NaClO3 were started. To evaluate altered gene expression by introduction of OsNRT1.1A, OsNRT1.1B, OsNRT1.1C, primers were designed for expression analysis of the high and low affinity NO3- transporters. Two lines of each transformation were used in the experiments, including wild type plants (WT) and chl1-5 mutant plants. The chlorate test showed the ability of OsNRT1.1A, OsNRT1.1B or OsNRT1.1C to nitrate uptake, evidenced by the decrease in fresh mass caused by the reduction of chlorate to chlorite by nitrate reductase, the chlorite a toxic product to cells. The insertion of transporter OsNRT1.1B caused the largest growth reduction in the chlorate test compared to OsNRT1.1A and OsNRT1.1C, aproximating to the same levels of wild-type (WT). Expression analyzes showed that the insertion of OsNRT1.1A, OsNRT1.1B and OsNRT1.1C genes into Arabidopsis thaliana chl1-5 was able to induce the expression of OsNRT2.1 and OsNAR2.1 genes, and the alternative splicing form of OsNRT1 .1A (OsNRT1.1Asa) did not significantly affect the expression of OsNRT2.1 and OsNAR2.1. The results show the ability of orthologs of NRT1.1 in rice (OsNRT1.1A, OsNRT1.1B and OsNRT1.1C) to nitrate uptake and signal to the expression of other nitrate transporters (transceptor), which may affect the nitrogen efficiency and uptake.eng
dc.contributor.advisor1Santos, Leandro Azevedo
dc.contributor.advisor1ID983.907.835-68por
dc.contributor.advisor-co1Sperandio, Marcus Vinícius Loss
dc.contributor.advisor-co1ID922.605.357-04por
dc.contributor.referee1Santos, Leandro Azevedo
dc.contributor.referee2Vidal, Marcia Soares
dc.contributor.referee3Souza, Marco André Alves de
dc.creator.ID018.193.906-16por
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/5325492321812485por
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentInstituto de Agronomiapor
dc.publisher.initialsUFRRJpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Agronomia - Ciência do Solopor
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dc.subject.cnpqAgronomiapor
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