Desenvolvimento de um RT-PCR RFLP para a detecção e diferenciação molecular das variantes vacinais e brasileiras do vírus da bronquite infecciosa das Galinhas

Abstract

A Bronquite Infecciosa das Galinhas (BIG) é uma doença causada por um vírus RNA de fita simples pertencente à Família Coronavidae, do gênero Gammacoronavirus. A BIG é uma doença de alta importância econômica para a avicultura mundial, não só por causar prejuízos aos plantéis acometidos pela doença, como também, por ser diagnóstico diferencial de diversas patologias importantes na sanidade avícola. O objetivo da presente pesquisa foi desenvolver uma técnica de RT-PCR RFLP capaz de detectar e discriminar com segurança as cepas do vBIG do sorotipo Massachusetts e BR a partir de tecidos da traqueia, rim e intestino em granjas de frango de corte e postura, no Estado do Rio de Janeiro. Neste estudo, foram coletadas 117 amostras de intestino, rim e/ou traqueia de um total de 50 aves provenientes de quatro granjas (três granjas de corte e uma granja de postura), no estado do Rio de Janeiro. O RNA total foi extraído de todas as amostras e submetidos a uma reação de transcrição reversa, para realizar a síntese do cDNA. As amostras de cDNA foram submetidas à técnica de RT-qPCR. Desta maneira, constatou-se que 92% das aves (n = 46/50) foram positivas em pelo menos um dos órgãos para o vírus da bronquite das galinhas (vBIG). A técnica de RT-PCR RFLP desenvolvido por esse trabalho foi capaz de detectar uma frequência de 94,64% (n = 53/56) das amostras pertencentes ao sorotipo BR-I, 3,57% (n = 2/56) das amostras apresentaram fragmentos com padrão semelhante ao esperado do sorotipo Massachusetts e 1,78% (1/56) apresentou padrão para ambos os sorotipos (Massachusetts e BR). Não houve diferença significativa entre a frequência da detecção molecular do vBIG nos tecidos da traqueia, rim e intestino de frangos de corte e galinhas de postura de granjas no estado do Rio de Janeiro. A técnica de RT-PCR RFLP foi capaz de detectar e difere.nciar com segurança os sorotipos Massachusetts e BR. A alta frequência do sorotipo BR demonstra que apesar de vacinadas, as aves desenvolveram a doença, sugerindo, que um novo protocolo vacinal deva ser abordado, já que a maioria das cepas encontradas pertence a um sorotipo geneticamente distinto.