Tecnologia IgY: produção de anticorpos aviários para Leishmania (Leishmania) amazonensis com o uso ético dos animais de experimentação

Abstract

A produção de anticorpo específico (IgY) em galinhas (Gallus gallus domesticus) e sua purificação a partir da gema do ovo vem atraindo o interesse da comunidade científica devido as inúmeras vantagens sobre os anticorpos IgG de mamíferos. Baixo custo, produção em quantidades elevada, reconhecimento de proteínas altamente conservadas de mamíferos, além de se evitar o sofrimento e morte de animais de experimentação, são as principais vantagens. O objetivo geral de nosso estudo foi desenvolver, padronizar e implantar a Tecnologia IgY para produção de anticorpos aviários, tendo como meta a obtenção de IgY-específica para formas promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis. Inicialmente, foi realizada adequação de dois métodos de precipitação e a comparação entre eles, visando a obtenção da IgY pura a partir da gema de ovos brancos adquiridos no comércio. O método de purificação empregando polietienoglicol (PEG-6000) foi capaz de extrair IgY com pureza comparável ao padrão IgY comercial (Sigma) e superior a obtida pelo método com sulfato de amônio 25%. Posteriormente, galinhas foram inoculadas com três doses de antígeno inativado (formas promastigotas de L. amazonensis) misturados com adjuvante incompleto de Freund, nos tempos 0, 14 e 21 dias, por via intramuscular. Elevado rendimento da IgY total e específica foi obtido, sendo determinado através dos métodos de Bradford e ELISA, respectivamente. Os anticorpos IgY apresentaram elevada especificidade (Imunofluorescência indireta), sensibilidade e avidez (ELISA) para formas promastigotas de L. amazonensis, a partir da segunda imunização. O nível de anticorpos IgY-específicos permaneceu elevado até o final da análise, por volta do 56º dia. Com base nos resultados obtidos podemos concluir que a Tecnologia IgY possibilita a obtenção de anticorpos com alta especificidade e sensibilidade, de forma ética, podendo ser utilizada com sucesso em diversos campo da ciência.