Avaliação do perfil protéico da postura de fêmeas de Rhipicephalus microplus infectadas por Metarhizium anisopliae.

Abstract

Os danos econômicos causados pelo carrapato Rhipicephalus microplus faz desse parasito um importante alvo de pesquisas. O seu controle é realizado, principalmente, com acaricidas químicos. A utilização de fungos para controlar carrapatos é uma escolha interessante uma vez que os fungos apresentam boa capacidade de dispersão, capacidade de penetrar via cutícula dos carrapatos e algumas cepas específicas para artrópodes, contribuindo para a preservação de organismos não-alvo. Estudos relacionados ao processo de infecção fúngica, sua repercussão na maturação dos oócitos e disponibilização de nutrientes para o embrião são aspectos importantes para se compreender melhor os efeitos desta infecção em carrapatos, contribuindo para avanço no controle deste ectoparasito. Dentro deste contexto, o presente trabalho avaliou as possíveis alterações no perfil proteico da postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae s.l. Cinco grupos (quatro tratados com M. anisopliae s.l. e um grupo controle), contendo 50 fêmeas cada, foram utilizados no bioensaio que consistiu na imersão das fêmeas nas concentrações conidiais (1 × 108, 1 × 107, 1 × 106 ou 1 × 105 conídios/mL) ou em água destilada estéril acrescida de Tween 80 0,1% (grupo controle) por três minutos. A postura diária de cada grupo foi separada e armazenada individualmente, durante 10 dias. Essas massas de ovos foram homogeneizadas separadamente, maceradas em tampão de lise celular e centrifugadas. O conteúdo protéico do sobrenadante foi determinado pelo método de Lowry modificado. O perfil proteico da postura diária foi analisado por SDS-PAGE 12. Não houve diferença estatisticamente significativa (p ≤ 0,05) quando o conteúdo proteico do grupo controle foi comparado com o dos grupos tratados. Na análise dos géis foram evidenciadas 19 bandas protéicas. Não foi observada diferença no perfil de bandas entre o grupo controle e os grupos tratados, bem como na comparação entre os perfis dos grupos tratados. Uma análise cromatográfica foi realizada para avaliação das possíveis diferenças entre os peptídeos presentes na postura de fêmeas do grupo tratado com 1 × 108 conídios/mL e o grupo controle. Cada amostra foi pré-purificada em três concentrações de acetonitrila (ACN) (5, 40 e 80%). Após concentradas, foram submetidas à Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando uma coluna analítica de fase reversa tipo C18. A atividade antimicrobiana das frações coletadas foi testada contra Candida albicans e M. anisopliae s.l. Nove amostras reduziram o crescimento de C. albicans em mais de 35%. O pico que apresentou maior atividade antimicrobiana contra a levedura pertenceu ao oitavo dia de postura do grupo infectado. Este pico resultou da pré-purificação em 5% de ACN e não foi observado em nenhum outro cromatograma. Este pico foi responsável por, em média, 80,94% de redução no crescimento da levedura. Não houve atividade microbiana destas amostras contra M. anisopliae s.l. O presente trabalho reporta, pela primeira vez, resposta induzida na postura de fêmeas de R. microplus infectadas com o fungo entomopatogênico M. anisopliae s.l.