Seleção de isolados de Metarhizium spp. para o controle do carrapato Rhipicephalus microplus: ensaios in vitro da virulência e conidiogênese

Abstract

O parasitismo causado por Rhipicephalus microplus, conhecido popularmente como carrapato dos bovinos, acarreta diversos prejuízos para a pecuária brasileira. O uso indiscriminado de produtos químicos para o seu controle tem gerado diversos efeitos negativos e nesse contexto, estudos envolvendo o fungo Metarhizium spp. para controle biológico de carrapatos tem demonstrado grande importância. O presente estudo avaliou a virulência de 11 isolados de Metarhizium spp. para fêmeas ingurgitadas, ovos e larvas de R. microplus e também o potencial de conidiogênese dos mesmos isolados e a sua relação com a virulência. Pontos únicos de inóculo e microcultivo entre lâmina e lamínula foram realizados a fim de avaliar a macro e micro morfologia dos isolados. Durante o bioensaio utilizando fêmeas ingurgitadas, foram avaliados os efeitos dos fungos sobre os parâmetros reprodutivos através da análise do percentual de controle de cada isolado após o tratamento por imersão das fêmeas em suspensões aquosas de 107 e 108 conídios/mL. A virulência dos isolados para ovos e larvas foi avaliada através da observação da taxa de eclosão e mortalidade, respectivamente, após tratamento com suspensões aquosas nas concentrações de 105, 106, 107 e 108 conídios/mL. Também foi calculada a CL50 e CL90 de cada isolado para larvas no vigésimo quinto dia após o tratamento. Para calcular a conidiogênese dos isolados, foram feitos três recortes aleatórios de 1,256 cm2 de área de cada placa contendo conídios fúngicos de 14 dias de cultivo, em seguida foram agitados em 1mL de solução de água destilada e tween 80 a 0,1% e uma alíquota desta suspensão foi quantificada com o auxilio de câmara de Neubauer e microscópio óptico. Os dados paramétricos foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey e os não paramétricos pelo teste de Kruskal Wallis seguido de Student-Newman-Keuls (SNK) com nível de significância de 5% através do software livre R Studio Versão 0.99.903 e o pacote “agricolae” (Statistical Procedures for Agricultural Research), versão 1.2-4. Adicionalmente foi aplicada estatística multivariada mediante a Análise de Componentes Principais (ACP) para parâmetros de fêmeas ingurgitadas. A análise macro e micromorfológica dos isolados testados se mostrou compatível com as descritas na literatura para Metharizium spp. De maneira geral, os resultados se apresentaram diretamente proporcionais às concentrações que foram testadas e os isolados ARSEF 729 de Metarhizium anisopliae e ARSEF 3643 de Metarhizium anisopliae senso latu, apresentaram os melhores resultados para fêmeas, ovos e larvas de R. microplus, demonstrando ser bons candidatos para estudos futuros. O isolado ARSEF 2211 de Metarhizium anisopliae senso latu demonstrou baixa virulência para todos os estágios. A conidiogênese dos diferentes isolados testados se mostrou muito variada e não apresentou nenhuma relação com a virulência dos mesmos. O presente estudo possibilitou a seleção de isolados de Metarhizium spp. com alta virulência para os diferentes estágios de vida do carrapato R. microplus bem como isolados com alta produção de conídios, ressaltando a importância de estudos que visem selecionar isolados adequados para serem utilizados futuramente em formulações para controle biológico a campo.