Please use this identifier to cite or link to this item: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/14656
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dc.contributor.authorSilva, Suzana Vieira da
dc.date.accessioned2023-12-22T03:04:06Z-
dc.date.available2023-12-22T03:04:06Z-
dc.date.issued2009-06-12
dc.identifier.citationSILVA, Suzana Vieira. Estudo semiempirico da inibição da AChE por policetídeos extraídos da esponja marinha Plakortis angulospiculatus. 2009. 57 f. Dissertação (Mestrado em Química). Instituto de Ciências Exatas, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2009.por
dc.identifier.urihttps://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/14656-
dc.description.abstractO Mal de Alzheimer é uma doença neurodegenerativa que atinge às funções cognitivas entre elas a memória, atenção e aprendizagem. A principal estratégia utilizada para seu tratamento está direcionado na busca de melhorar a hipofunção colinérgica, inibindo a enzima acetilcolinesterase, para que a acetilcolina possa permanecer mais disponível na fenda sináptica para as realizações das sinapses, já que esta enzima tem a função de hidrolisar a acetilcolina. A natureza oferece uma enorme variedade de substâncias utilizadas como fármacos e as esponjas marinhas tem demonstrado serem ricas nestas substâncias. Foram extraídos da esponja Plakortis angulospiculatus três policetídeos que através do método Ellman demonstraram atividade anticolinesterásica. Através de técnicas de Modelagem Molecular, foram realizados cálculos semiempiricos utilizando o método PM3 para analisar as interações geométricas e energias envolvidas no complexo policetídeos-acetilcolinesterase com o objetivo de analisar uma possível utilização destes como fármacos para o Mal de Alzheimer. Como não se conhecia o estado em que o sítio se encontraria (com a Ser200 e His440 neutros ou não) no momento da interação, foram realizados cálculos para os três policetídeos em ambos os sítios. Estudos com inibidores já conhecidos tacrina e huprina X (ambas neutra e protonadas) também foram realizados em ambos os sítios a fim de comparação. O resultados obtidos neste trabalho mostraram a confiabilidade do método empregado, assim também como valores de entalpia favoráveis para a formação de todos os complexos policetídeo-acetilcolinesterase independente do sítio. Observou-se pelos valores energéticos uma preferência quando os mesmos se encontravam no sítio protonado diferencialmente dos inibidores tacrina e huprina X que independente do seu estado (protonados ou não) mostraram melhor interação pelo sítio neutro. Os cálculos realizados para a tacrina demonstraram que mesmo após otimização as principais interações já descritas pela literatura se mantiveram e que possivelmente ela se encontra protonada dentro do sítio visto os valores de energia encontrados para esta estrutura. A huprina X que é um híbrido da tacrina com a huperzina A mostrou as interações mais significativas assim também como os valores energéticos mais favoráveis, o que está de acordo com a alta constante de inibição de 26pM encontrados na literatura para a acetilcolinesterase de humano. Diante dos dados obtidos podemos concluir que os policetídeos apesar de obterem valores energéticos favoráveis a formação do complexo policetídeo-acetilcolinesterase estes valores não são competitivos com os valores energéticos encontrados para os inibidores tacrina e huprina X. No entanto, na fabricação de um fármaco não são levados em conta apenas interações energéticas e como a tacrina já demonstrou possuir alta toxicidade hepática, além de reações adversas como náusea e vômito, os policetídeos por serem substância naturais poderiam neste caso ser competitivos se demonstrassem possuir reações adversas mais brandas.por
dc.description.sponsorshipCAPESpor
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal Rural do Rio de Janeiropor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectacetylcholinesteraseeng
dc.subjectpolyketideseng
dc.subjectmolecular modellingeng
dc.subjectAcetilcolinesterasepor
dc.subjectpolicetídeospor
dc.subjectModelagem Molecularpor
dc.titleEstudo semiempirico da inibição da enzima AChE por policetídeos extraídos da esponja marinha Plakortis angulospiculatuspor
dc.title.alternativeSemi-empirical study of inhibition of AChE by polyketides Extracted from the marine sponge Plakortis angulospiculatuseng
dc.typeDissertaçãopor
dc.description.abstractOtherThe Evil of Alzheimer is a disease neurodegenerativa that reaches to the cognitive functions among them the memory, attention and learning. The main strategy used for his/her treatment is addressed in the search of improving the hipofunção colinérgica, inhibiting the enzyme acetylcholinesterase, so that the acetylcholine can stay more available in the rift sináptica for the accomplishments of the sinapses, since this enzyme has the hidrolisar function the acetylcholine. The nature offers an enormous variety of substances used as fármacos and the sea sponges has been demonstrating be rich in these substances. They were extracted of the sponge Plakortis angulospiculatus three polyketides that through the method Ellman demonstrated activity anticolinesterásica. Through techniques of Molecular Modelling, calculations semiempiricos were accomplished using the method PM3 to analyze the geometric interactions and energies involved in the compound polyketidesacetylcholinesterase with the objective of analyzing a possible use of these as fármacos for the Evil of Alzheimer. As if he/she didn't know the state in that the ranch would be (with Ser200 and neutral His440 or no) in the moment of the interaction, calculations were accomplished for the three polyketides in both ranches. Studies with inhibitors already known tacrina and huprina X (both neutral one and protonadas) they were also accomplished at both ranches in order to comparison. Resulted obtained he in this work showed the reliability of the employed method, likewise as values of favorable entalpia for the formation of all the compounds independent pollyketide-acetylcholinesterase of the ranch. It was observed by the energy values a preference when the same ones if they found in the ranch protonado diferencialmente of the inhibitors tacrina and huprina X that independent of his/her state (protonados or no) they showed better interaction for the neutral ranch. The calculations accomplished for the tacrina demonstrated that even after optimization the main interactions described already by the literature stayed and that possibly she meets protonada inside of the seen ranch the values of energy found for this structure. The huprina X that is a hybrid of the tacrina with the huperzina A it showed HER likewise the most significant interactions as the more favorable energy values, what is in agreement with the high constant of inhibition of 26pM found in the literature for human's acetilcolinesterase. Before the obtained data we can end that the polyketides in spite of they obtain favorable energy values the formation of the compound polyketide-acetylcholinesterase these values are not competitive with the energy values found for the inhibitors tacrina and huprina X. however, in the production of a fármaco they are not taken into account just energy interactions and as the tacrina it already demonstrated to possess high hepatic toxicity, besides adverse reactions as nausea and vomit, the polyketides for they be natural substance were able to in this case be competitive if they demonstrated to possess softer adverse reactions.eng
dc.contributor.advisor1Silva, Clarissa Oliveira da
dc.contributor.advisor1ID014.109.957-71por
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3211933004567550por
dc.contributor.advisor-co1Sant Anna, Carlos Mauricio Rabello de
dc.contributor.advisor-co1ID827.232.227-72por
dc.contributor.referee1Epifanio, Rosângela de Almeida
dc.contributor.referee2Souza, Anivaldo Xavier de
dc.creator.ID021.017.497-85por
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/3141998079907351por
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Exataspor
dc.publisher.initialsUFRRJpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Químicapor
dc.relation.referencesABREU, IZABELLA D. de; FORLENZA, ORESTES, V.; BARROS, HÉLIO LAUAR DE; Demência de Alzheimer: correlação entre memória e autonomia; Revista de Psiquiatria Clínica; v.32(3); 131-136; 2005. ALMEIDA, O. P.; Tratamento da Doença de Alzheimer Avaliação crítica sobre o uso de anticolinesterásicos; Arquivos de Neuropsiquiatria; v.56(3-B); 688-696; 1998. ANDRADE, MARCELO T.; LIMA, JOSÉLIA A.; PINTO, ÂNGELO C.; RESENDE, CLAUDIA, M.; CARVALHO, MERIANE P.; EPIFANIO, ROSANGÊLA A.; Índole alkaloids Tabernaemontana australis (Muell. Arg) Miers that inhibit acetylcholinesterase enzyme; Bioorganic & Medicinal Chemistry; v.13; 4092-4095; 2005. BARRIL, X.; OROZCO, M.; LUQUE, F. J.; Towards improved acetylcholinesterase inhibitors: A structural and computational approach; Medicinal Chemistry; v.1; 255-266; 2001. BEAR, M. F.; CONNORS, B. W.; PADISO, M. A.; Neurociências: desvendando o sistema nervoso; coord. Trad. Jorge Alberto Quillfeldt; 2ª edição; Porto Alegre: Artmed; 2002. BELEDO, J. F.; Terapéutica farmacológica de las demencias; Medicine; v.7(99); 4633- 4643; 1998. BIRKS, R.; MACINTOSH, F. C.; Acetylcholine Metabolism of A Sympathetic Ganglion; Canadian Journal of Biochemistry and Physiology; v.39; 787; 1961. BLOKLAND, A.; Acetylcholine: a neurotransmitter for learning and memory?; Brain Research Reviews; v.21; 285-300; 1996. BOTTI, S. A.; FELDER, C. E.; LIFSON, S.; SUSSMAN, J. L.; SILMAN, I.; A Modular Treatmen of Molecular Traffic Through the Active Site of Cholinesterase; Biophysical Journal; v.777; 2430-2450; 1999. CACABELOS, R.; Enfermedade de Alzheimer Presente Terapéutico y Retos Futuros, v.XXX; n°04; 2001. CARVALHO, M. P.; MATOS, F., O. P.; EPIFANIO, R. A.; Novos agentes anticolinesterásicos a partir de invertebrados marinhos; IX Encontro Regional da Sociedade Brasileira de Química; IME (RJ); 2003. CARVALHO, M. P.; MATOS, D. D.; EPIFANIO, R. A.; Anticolinesterásicos de esponjas marinhas brasileiras, 29ª Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química; Águas de Lindóia (SP); 2006. 52 CASTRO, A. T.; Estudos por modelagem molecular da Reativação da Acetilcolinaesterase inibida por agentes químicos neurotóxicos; dissertação de mestrado; IME; 2002. CASTRO, B. M.; Funções motoras em camundongos deficientes do transportador vesicular de acetilcolina (VAChT); dissertação de mestrado; UFMG; 2006. CAULFIELD, M. P.; BIRDSALL, N. J. M.; International union of pharmacology XVII Classification of muscarinic acetylcholine receptors; Pharmacological Reviews; v.50; nº2; 279-289; 1998. CHAVES, M. B.; AVERSI-FERRERA, T. A.; Terapia Medicamentosa da Doença de Alzheimer; Revista Eletrônica de Farmácia; v.01; 1-7; 2008. COSTA, A. F.; PICON, P. D.; AMARAL, K. M.; Protocolo de Diretrizes Terapêuticas Doença de Alzheimer; Portaria SAS/MS nº 843; 2002. DARVESH, S.; HOPKINS, DA.; GEULA, C.; Neurobiology of butyrylcholinesterase; Nature Reviews Neuroscience; v.04; 131-138; 2003. DAS, A.; DIKSHIT, M.; NATH, C.; Profile of acetylcholinesterase in brain areas of male and female rats of adult and old age; Life Sciences; v.68; 1545-1555; 2001. DOMINGUES, S. F.; Caracterização das Interações Protéicas envolvidas no tráfego celular do transportador de colina de alta afinidade- CHT1; Dissertação de mestrado; UFMG; 2006. ENGELHARDT, E.; BRUCKI, S. M. T.; CAVALCANTI, J. L. S.; FORLENZA, O. V.; LAKS, J.; VALE, F. A. C. e membros do Departamento de Neurologia Cognitiva e do Envelhecimento da Academia Brasileira de Neurologia; Tratamento da Doença de Alzheimer; Arquivos de Neuropsiquiatria; v.63(4); 1104-1112; 2005. EPIFANIO, R. A; PINHEIRO, L. S.; ALVES, Natalia, C.; Polyketides from the Marine Sponge Plakortis angulospiculatus; Journal of Brazilian Chemical Society; v.16; nº 6B; 1367-1371; 2005. FILHO, J. M. B.; MEDEIROS, K. C. P.; DINIZ, M. F. F. M.; BATISTA, L. M. B.; FILHO, PETRÔNIO F. A.; SILVA, M. S.; CUNHA, E. V. L.; ALMEIDA, J. R. G. S.; JÚNIOR, L. J. Q.; Natural products inhibitors of the enzyme acetylcholinesterase; Brazilian Journal of Pharmacognosy; v.16(2); 258-285; abr/jun 2006. FORLENZA, O. V.; Tratamento Farmacológico da doença de Alzheimer, Revista de Psiquiatria Clínica; v.32(3); 137-148; 2005. FRESH, A.; Structure and Mechanism in Protein; Science W. H. Freeman and Company; New York; 1999. FUXREITER, M.; WARSHEL, A.; Origin of the Power of Acetylcholinesterase: Computer Simulation Studies; Journal of the American Chemical Society; v.120; 183- 194; 1998. 53 GANDIA, L.; ROJO, J.; GONZÁLEZ-RUBIO, J. M.; TAPIA, L.; PASCUAL, R.; HERMANDEZ-GUIJO, J. M.; Dianas Terapêuticas colinérgicas em la enfermedade de Alzheimer; Madri; 2002. GLABE, C.; Avoiding Collateral Damage in Alzheimer´s disease treatment; Biomedicine; v.314; 602-603; 2006. GOEDERT, M.; SPILLANTINI, M.; A Century of Alzheimer Disease; Science; v.314; 777-779; 2006. GOLD, P. E.; Acetylcoline modulation of neural systems involved in learning and memory; Neurobiology of learning and Memory; v.80; 194-210; 2003. GOMES, A. M.; KOSZUOSKI, R.; Evidências atuais do impacto terapêutico dos inibidores da acetilcolineterase no transtorno cognitivo leve e na demência vascular; Revista Brasileira de Psiquiatria RS; v.27(2); 197-205; 2005. HOFFMAN, B. B.; TAYLOR, P.; Goodman and Gilman’s: The Pharmacological Basis of Therapeutics. McGraw-Hill; New York; 2001. HOSEA, N. A.; BERMAN, H. A.; TAYLOR, P.; Specificity and Orientation of trigonal Carboxyl Esters and tetrahedral Alkylphosphonyl Esters in Cholinesterase; Biochemistry; v.34; 11528-11536; 1995. INOUYE, K.; OLIVEIRA, G. H.; Avaliação crítica do tratamento farmacológico atual para doença de Alzheimer; Infarma; v.15; 11-12; 2003. JENSEN, F.; Introduction to Computational Chemistry; Editora John Wiley & Sons; 1999. JOSÉ, A. S.; Atividade da Acetilcolineserase e da Porfobilinogênio – Síntese e alteração comportamental de ratos expostos à nicotina; dissertação de mestrado;UFMG; 2007. JÚNIOR, C. V.; BOLZANI, V. S.; FURLAN, M.; Produtos Naturais como candidatos a fármacos úteis no tratamento do Mal de Alzheimer; Química Nova; v.27; nº 04; 655-660; 2004. KOELLNER, G.; KRYGER, G.; MILLARD, C. B.; SILMAN, I.; SUSSMAN, J. L.; STEINER, T.; Active-site gorge and buried water molecules in crystal structures of acetylcholinesterase from Torpedo californica; Journal of Molecular Biology; v.296(2); 713-735; 2000. KOSSUGA, M. H.; NASCIMENTO, A. M.; PESSOA, C. Ó; TEMPONE, A.; HADJU, E.; BERLINCK, R. G. S.; Avaliação biológica de compostos isolados da esponja Plakortis angulospiculatus; 30ª Reunião anual da Sociedade Brasileira de Química; Águas de Lindóia (SP); 2007. LEHNINGER, A. L.; Princípios de Bioquímica; 4ª edição; SP: Sarvier, 2006. 54 MARCO, J. L.; Inhibidores clásicos y nuevos inhibidores de la acetilcolinesterasa para tratar la enfermedade de Alzheimer; Madri; 2002. MISGELD et al..; Roles of neurotransmitter in synapse formation: Development of neuromuscular junctions lacking choline acetyltransferase; Neuron; v.36; 635-648; 2002. MORGON, N. H.; COUTINHO, K.; Métodos de Química teórica e Modelagem Molecular; SP: Editora Livraria da Física; 1ª edição; 2007. NAGUIB, M.; FLOOD, P.; McARDLE, J. J.; BRENNER, H. R.; Advances in Neurobiology of the Neuromuscular Junction – Implications for the Anesthesiologist; Anesthesiology; v.96; 202-231; 2002. NARDINI, M.; DIJKSTRA, B. W.; /β Hydrolase fold enzymes: the family keeps growing; Current Opinion in Structural Biology; v.09 (6); 732-737; 1999. OBREGON, A. D. C.; 3-alcoxi-4-hidroxi pirrolidin-2-onas, 2-metilsulfanil pirimidina, enoil-carbamatos e 3-dialcoxifosforiloxi trialometilados: síntese e potencial inibitório sobre a atividade da enzima acetilcolinaesterase; Tese de doutorado; Santa Maria; 2006. OLIVEIRA, D. L. C.; Ciclo de Vesícula Sinaptica com conteúdo reduzido em junção neuromuscular; dissertação de mestrado; UFMG; 2007. ORDENTHICH, A.; BARAK, D.; KRONMAN, C.; ARIEL, N.; SEGALL, Y.; VELAN, B.; SHAFFERMAN, A.; Functional Characteristics of the oxyanion hole in human acetylcholinesterase; Journal Biological Chemistry; v.273(31); 19509-19517; 1998. PARSONS, S. M.; Transport Mechanisms in Acetylcholine and monoamine storage; Faseb Journal; v.14; 2423-2434; 2000. PASTRE, R.; M. R., ANDREY-FILHO, E. R.; Diversidade de policetídeos produzidos por espécies de Penicillium isoladas de Melia azedarach e Murraya paniculata; Química Nova; v.30; nº 08; 1867-1871; 2007. PRADO, M. A. M.; REIS, R. A. M.; Prado, V. F.; MELLO, M. C.; GÓMEZ, M. V.; MELLO, F. G.; Regulation of acetylcholine syntesis and store; Neurochemistry International; v.41; 291-299; 2002. PURVES, D. et al.; Neuroscience; second edition; Sinauer Associates; 2001. ROBERSON, E. D.; MUCKE, L.; 100 Years and Counting: Prospects for Defeating Alzheimer’s Disease; Science; v.314; 781; 2006 ROLE, L. W.; BERG, D. K.; Nicotinic Receptors in the development and molulation of CNS Synapses Neuron; Neuron; v.16(6); 1077-1085; 1996. ROSENBERRY, T. L.; Adv. Enzymol. Relat. Áreas Mol Biol.; v.43; 103; 1975. 55 SANT’ANNA, C. M. R.; VIANA, A. S.; JÚNIOR, N. M. N.; A Semiempirical study of acetylcholine hydrolysis catalyzed by Drosophila melanogaster acetylcholinesterase; Bioorganic Chemistry; v.34; 77-89; 2006. SCHUMACHER, M.; CAMP, S.; MAULET, Y.; NEWTON, M.; MACPHEE-QUIGLEY, K.; Primary Structure of Torpedo californica Acetylcholinesterase Deduced from cDNA sequences; Nature; v.319; 407-409; 1986. SELWOOD, T.; FEASTER, S. R.; STATE, M. J.; PRYOR, A. N.; QUINN, D.; Parallel Mechanisms in Acetylcholinesterase – Catalyzed Hydrolysis of Choline Esters; Journal American Chemical Society; v.115; 10477-10482; 1993. SEPČIĆ, K.; MARCEL, V.; KLAEBE, A.; TURK, T.; ŠUPUT, D.; FOURNIER, D.; Inhibition of acetylcholinesterase by alkylpyridinium polymer from the marine sponge, Reniera sarai; Biochimica et Biophysica Acta; v.1387; 217-225; 1998. SEPČIĆ, K.; POKLAR, N.; VESNAVER, G.; FOURNIER, D.; TURK, T; Maček, P.; Interation of 3-Alkylpyridinium Polymers from the Sea Sponge Reniera sarai with Insect Acetylcholinesterase; Journal of Protein Chemistry; v.18; nº 3; 1999. SIDELL, F. R.; Clinical Effects of Organophosphorus Cholinesterase Inhibitors; Journal Apllied toxicology; v.14(2); 111-113; 1994. SILVA, D C.; FEITOSA, C. M.; SANTOS, F. J. B.; CAVALCANTE, A. A. C. M.; A importância da Análise fitoquímica na busca de novos inibidores da enzima acetilcolinaesterase (AChE) com plantas medicinais; I Congresso de Pesquisa e Inovação da Rede Norte de Educação Tecnológica, Natal (RN); 2006. SILVA, G. R.; Estudo da Reativação da Acetilcolinaesterase inibida por organofosforados: análise conformacional da molécula de HI-6 e simulação da Reação de desfosforilação; dissertação de mestrado, IME, 2005. SOREQ, H; SEIDMAN, S.; Acetylcholinesterase – new roles for an old actor; Neuroscience; v.02; 8; 2001. STINE, K. E.; Brown, T. M.; Principles of Toxicology; CRC Press; 1996. SUSSMAN, J. L.; HAREL, M.; PROLOW, F.; OEFNER, C.; GOLDMAN, A.; TOKER, L.; SILMAN, I.; Atomic Structure of acetylcholinesterase from Torpedo californica: a prototypic acetylcholine – binding protein; Science; v.253; 872-879; 1991. TAYLOR, P.; RADIĆ, Z.; The cholinesterases: from genes to proteins; Annual Review Pharmacology and Toxicology; v.34; 281-320; 1994. TORSELL, K. B. G.; Natural Product Chemistry: approach to secondary metabolism; Editora John Wiley & Sons; 1983. TÕUGU, V.; Acetylcholinesterase: Mechanism of catalusis and inhibition; Current Medicinal Chemistry; v.01; 155-170; 2001.por
dc.subject.cnpqQuímicapor
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