Análise citológica, detecção e caracterização molecular de bactérias das famílias Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae em populações de pequenos mamíferos em áreas de Floresta Amazônica

Abstract

O presente trabalho teve por objetivo realizar a detecção e a caracterização molecular de bactérias da família Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae em populações de pequenos mamíferos em áreas de Floresta Amazônica, no estado do Acre, Brasil. A importância desta investigação está pautada em bactérias intracelulares obrigatórias que participam nos ciclos silvestres como agentes zoonóticos, e, portanto, de interesse para a saúde humana, além de parasitos de importância para os animais domésticos, e a própria ecologia e ciclo de vida do animal hospedeiro. Asáreas de estudos se concentram em áreas de mata da floresta amazônica, na cidade de Rio Branco, estado do Acre, Brasil. Para o diagnóstico direto foram utilizadas 186 amostras de lâminas de esfregaço sanguíneo, oriundas de roedores, marsupiais e morcegos capturados previamente, visando a detecção e caracterização de bactérias da família Anaplasmataceae e Mycoplasmataceae. Amostras de parênquima hepático armazenadas em RNA Later® tiveram seu DNA extraído pelo kit “DNeasy Blood & Tissue” (Qiagen®) e foram utilizadas no diagnóstico molecular. Dentre as amostras analisadas 14,52%(n=27/186) foram consideradas positivas para hemoplasmas hemotrópicos através de PCR usando os primers Myco 322s e Myco 938as, que amplificam 620 pares de bases do fragmento de 16S rDNA. O diagnóstico para Anaplasmataceae foi dificultado pela inespecificidade das reações de PCR com os pares de primers testados, e quando a técnica foi específica, resultou em fragmento de 16S rDNA de Wolbachia sp. Por esse motivo, estes dados de positividade não foram considerados para análise. A positividade em lâmina de esfregaço sanguíneo para bactérias da família Anaplasmataceae foi de 6,99% (n=13/186), enquanto para micoplasmas hemotrópicos foi de 1,61% (n=3/186). A localidade de Santa Cecília apresentou a maior frequência de positividade para no diagnóstico molecular de Mycoplasma spp. (25,9%, n=7/48). Com relação ao resultado de sequenciamento do fragmento do 16S rDNA de micoplasmas hemotrópicos, três amostras de morcegos dos gêneros Glossophaga (ID 22052), Artibeus (ID 22108), Carollia (ID 22152) tiveram suas sequências com boa leitura no cromatograma, com aproximadamente 600pb. O maior percentual de similaridade Blast para 22052 foi de 98,41% com amostra de Mycoplasma sp. de um Glossophaga commissarisi (LR699022) da Costa Rica; para 22108 foi de 99,82% com amostra de Mycoplasma sp. de um Platyrrhinus lineatus (MZ048291) do Mato Grosso do Sul, Brasil; e para 22152 foi de 98,28% com amostra de Mycoplasma sp. de um Desmodus rotundus de Belize (KY932722). Este estudo revelou diferentes genótipos de micoplasmas hemotrópicos presentes em morcegos e demonstrou a presença de mórulas características de bactérias da família Anaplasmataceae em leucócitos e plaquetas de roedores, marsupiais e morcegos. Estes achados sugerem que micoplasmas hemotrópicos circulem entre morcegos do Acre, e que muito ainda há de ser descoberto em relação as espécies de bactérias intracelulares obrigatórias nestes animais.