Criopreservação de ovocitos imaturos de bovinos com 1, 2 propanediol

Abstract

Estudou-se o comportamento de ovócitos imaturos bovinos submetidos à criopreservação clássica com duas concentrações diferentes do crioprotetor propanediol. Utilizou-se ovócitos imaturos, envoltos em células do “cumulus”, oriundos de bovinos abatidos em matadouro. Os ovócitos foram distribuídos em dois tratamentos e um grupo controle. No tratamento I utilizou-se 1,6 M de propanediol, no qualos ovócitos foram desidratados em três etapas crescentes (0,53 M; 1,06 M e 1,6 M, com10 minutos cada etapa) à temperatura ambiente, e congelados pelo método clássico. Os ovócitos foram descongelados em água a 37oC por 30 segundos, e reidratados em

três etapas decrescentes (1,6 M; 1,06 M e 0,53 M, acrescidos de 0,25 M de sacarose, com 7 mi- nutos cada etapa). No tratamento II utilizou-se 2,0 M de propanediol em três etapas crescentes

para desidrataçãodos ovócitos (0,7 M; 1,4 M e 2,0 M com 10 minutos cada), e reidrataçãotam- bém em três etapas decrescentes (20M; 1,4 M e 0,7 M acrescidos de 0,25 M de sacarose, com 7

minutos cada etapa). O congelamento e descongelamento foram idênticos a otratamento I. Após a reidratação os ovócitos de ambos os tratamentos foram lavados duas vezes em meio TCM 199, e levados para maturação “in vitro”. O grupo controle foi constituído de ovócitos recém colhidos (não congelados). Todos os ovócitos foram colocados para maturação por 24 h em meio TCM 199 com soro de vaca em estro e FSH em co-cultura com células da granulosa com 5 % CO2 no ar a 39 oC. Os resultados foram semelhantes (P>0,05) para as duas molaridades de propanediol

utilizado, quando se avaliou a morfologia, desnudamento, rompimento da “zona pelúcida” e ex- pansão das células do “cumulus”. De 308 ovócitos analisados nos tratamentos I e II, 69,48 %

apresentaram morfologia normal, corn células do “cumulus” fracamente aderidas e 5,2 % apre- sentaram desnudamento. O rompimento da “zona pelúcida” não ocorreu após o descongelamento,

o que foi observado em 19, 15 % dos ovócitos apos a maturação “in vitro”, quando do desnuda- mento. A expansão das células do “cumulus” após maturação foi observada em todos os ovócitos.

A taxa de maturação nuclear não foi diferente (P>0,05) entre os ovócitos criopreservados. De 98 ovócitos criopreservados com 1,6 M, 2,04 % atingiram metáfase II e de 135 criopreservados com 2,0 M, nenhum atingiu a metafase II. Esses resultados diferem do grupo controle (P<0,05), onde de 131 ovócitos, 84 % atingiram a metáfase II. Verificou-se que a morfologia dos ovócitos, após descongelamento e expansão das células

do “cumu1us”, não foi relacionada com a taxa de maturação“in vitro”, e que a presença das célu- las do “cumulus” na criopreservação pode propiciar maior proteção à “zona pelúcida”. O propa- nediol não foi um bom crioprotetor para ovócitos imaturos de bovinos nas duas concentrações

usadas no método de criopreservação clássica.