Padronização de bioensaios para avaliação de eficácia de inseticidas sobre larvas de Cochliomyia hominivorax (Diptera, Calliphoridae)

Abstract

Cochliomyia hominivorax é o principal agente etiológico da miíase na América Latina e, embora exista atualmente uma ampla gama de fármacos disponíveis para o controle de seus estágios parasitários, tem sido relatada eficácia reduzida de alguns compostos. Portanto, bioensaios in vitro são essenciais para detectar resistência e avaliar os métodos de exposição mais eficazes para cada inseticida. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de diferentes metodologias de bioensaio in vitro contra larvas de terceiro instar (L3) de C. hominivorax. Quatro ingredientes ativos, clorpirifós, fipronil, fluralaner e doramectina, foram testados utilizando duas metodologias: impregnação em papel de filtro e imersão larval por um, três e cinco minutos. Nos ensaios de impregnação, nove concentrações de cada ingrediente ativo (10.000–1 μg/mL para clorpirifós, doramectina e fluralaner, e 5.000–1 μg/mL para fipronil) foram aplicadas em discos de papel de filtro, juntamente com um controle não tratado e um grupo controle de veículo, contendo apenas o diluente. Após a secagem, os discos foram colocados em placas de Petri e dez larvas L3 de C. hominivorax foram adicionadas a cada disco. Nos ensaios de imersão, grupos de dez larvas L3 foram submersos em soluções contendo as mesmas nove concentrações utilizadas nos testes de impregnação, além dos grupos controle e controle com o veículo. Todos os ensaios foram realizados em sextuplicata. Os efeitos larvicidas foram avaliados 24, 48 e 72 horas após a exposição, e a inibição da emergência de adultos foi avaliada 10 dias após a incubação; as concentrações letais (CL50) foram estimadas usando análise Probit no software RStudio. Às 72 h, os valores de CL50 do clorpirifós foram 100,5, 777,3, 259,3 e 302,3 μg/mL para as metodologias de impregnação e imersão de um, três e cinco minutos, respectivamente. Para o fipronil, as CLs50 calculadas foram de 76,8, 14,5, 1,2 e 2,4 μg/mL, respectivamente. Para o fluralaner, os valores de CL50 foram 267,5, 2068,9, 872,9 e 635,5 μg/mL, respectivamente. Para a doramectina, as CLs50 calcualdas foram de 676,3, 334,3, 255,1 e 215,3 μg/mL, respectivamente. Em relação à inibição da emergência, os valores de CL50 para o fluralaner foram 15,4, 302,7, 92,0 e 67,7 μg/mL e para doramectina, atingiram 4,2, 19,7, 15,1 e 7,0 μg/mL, utilizando as metodologias de impregnação e imersão de um, três e cinco minutos, respectivamente. Para o clorpirifós, os valores de CL50 puderam ser calculados apenas para a metodologia de imersão, resultando em 541,2, 114,7 e 120,1 μg/mL para 1, 3 e 5 minutos, respectivamente. Já para o fipronil, os valores de CL50 foram estimados apenas para as metodologias de impregnação e imersão de um minuto, resultando em 13,5 e 4,6 μg/mL, respectivamente. Os resultados demonstram que a metodologia in vitro utilizada interfere na atividade de cada um dos compostos testados.