Extração, isolamento e caracterização de antocianinas de fontes naturais e a sua aplicação na análise de alimentos por cromatografia líquida

Abstract

Nos últimos anos, o grande interesse por alimentos naturais, saudáveis e que possam trazer consigo a proposta de atuar como coadjuvantes na redução do risco de doenças crônicas tem impulsionado o meio científico a identificar e quantificar os seus princípios ativos. As antocianinas, pigmentos hidrossolúveis presentes em alimentos de origem vegetal, apresentam efeitos bioativos que estão relacionados ao seu poder antioxidante. Sendo assim, vários trabalhos científicos vêm relatando a importância do seu desempenho na redução do risco de desenvolvimento de doenças como as cardiovasculares, do sistema imunológico, câncer e sua progressão. Para sua análise de identificação e quantificação, há necessidade de se adquirir padrões analíticos. Devido à grande diversidade de substituintes em sua estrutura, o desafio está em encontrar disponíveis comercialmente padrões de referência dessas diversas substâncias. Este trabalho teve como objetivo estudar e selecionar matrizes que possam servir de fontes para obtenção de padrões antociânicos. Neste contexto, a obtenção destes padrões a partir de fontes naturais poderá viabilizar a determinação, de forma mais precisa, das concentrações existentes dessas substâncias em alimentos que estejam na forma natural ou processados. Para condução do trabalho foram realizados estudos para melhoria das etapas cromatográfica, de extração, e de isolamento e purificação das antocianinas. Nas análises cromatográficas foram utilizados os sistemas de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE/DAD) e Cromatografia de Ultra Eficiência (CLUE) acoplado ao detetor de massas acuradas Q-TOF (ESI+). No desenvolvimento do método cromatográfico, reduziu-se o tempo da corrida com uso de coluna com partícula inferior a 3μm. Foram testados três procedimentos de extração da substância na matriz, visando proporcionar rapidez à técnica. Para o isolamento e purificação das substâncias, foram utilizados três tipos de técnicas: uso de uma válvula seletora de canais Rheodyne de seis canais; coluna aberta de vidro (fase C18) e cartuchos Sep Pak C18 e Oasis® MCX Cation-Exchange SPE (troca iônica). Após as etapas de melhoria e desenvolvimento, foram estudadas ao todo 43 matrizes como potenciais fontes provedoras de padrões de antocianinas. As substâncias foram separadas por CLAE e caracterizadas com auxílio conjunto de quatro parâmetros: tempo de retenção, dados da relação espectrofotométrica na região do UV-Vismáx com as estruturas da molécula, massas acuradas dos seus íons moleculares e fragmentos e, distinção das rotas de fragmentações. Assim sendo, esses parâmetros permitiram a identificação nas matrizes de substâncias que após isoladas puderam ser utilizadas como padrões, com alto grau de pureza, permitindo assim a identificação e quantificação de antocianinas nas análises cromatográficas. No presente trabalho foi possível ainda realizar a validação do método de análise cromatográfica desenvolvido e implantado, o qual foi aplicado para o estudo e caracterização dos perfis antociânicos até então desconhecidos de dois frutos da família das Myrtaceae.