Diversidade genética da sequência 18S do DNA ribossomal de Theileria equi em equinos oriundos das cinco regiões geográficas do Brasil

Abstract

A piroplasmose equina, causada pelo hemoparasito Theileria equi, é endêmica no Brasil e é considerada uma das principais doenças de equinos no mundo. O objetivo do presente estudo foi investigar a diversidade genética de isolados geograficamente distintos de sequências do gene 18S rRNA de T. equi em equinos naturalmente infectados provenientes das cinco regiões do Brasil, caracterizar as regiões hipervariáveis das sequências 18S rRNA de T. equi deste estudo e elucidar as relações taxonômicas entre os isolados de T. equi do Brasil e do mundo. As amostras de sangue dos equinos foram coletadas nas cinco regiões do país. O DNA genômico foi extraído e as amostras foram submetidas a PCR em tempo real para a seleção das amostras positivas. Posteriormente, as amostras selecionadas foram submetidas a PCR convencional para a amplificação do gene 18S rRNA (~1600 pb) de T. equi, sendo os produtos sequenciados. As sequências foram alinhadas utilizando o ClustalW, e o alinhamento foi submetido ao método de reconstrução da Máxima Verossimilhança com distâncias moleculares estimadas pelo General Time Reversible Model, utilizando 1000 repetições. Desse alinhamento foi desenvolvida uma matriz de similaridade e foram observadas as regiões hipervariáveis. As análises filogenéticas foram realizadas de três formas distintas: utilizando sequências de T. equi do Brasil, utilizando sequências de diferentes espécies de Theileria e Babesia, e utilizando sequências de T. equi provenientes de todo o mundo. Foram obtidas vinte e três sequências parciais do gene 18S rRNA de T. equi, sendo treze delas variantes únicas do gene no Brasil. As regiões do gene hipervariáveis V2, V4 e V8 foram identificadas nas amostras do estudo, sendo a V4 a mais variável. Essas regiões hipervariáveis foram confirmadas pela análise de entropia. Foram identificados dois genótipos distintos circulantes nas regiões do Brasil. Apenas na região Norte foi observado um único genótipo, enquanto que nas demais regiões observaram-se ambos. As amostras se agruparam em dois clados (A e C), estando a maioria das sequências do estudo agrupadas no clado C. Em outra árvore, todas as sequências de T. equi se agrupam dentro do grupo 1, diferente das demais theilerias e babesias, presentes nos grupos 2 e 3. Em relação às amostras de T. equi do mundo, três clados foram observados: A, B e C. Este estudo acrescenta importantes informações sobre a diversidade gênica de T. equi em equinos de todas as regiões do Brasil baseado na sequência 18S rRNA.