Aplicação de técnicas moleculares para o monitoramento da diversidade genética de Staphylococcus aureus em ambientes de produção leiteira

Abstract

A produção leiteira bovina no Brasil está em constante crescimento sendo predominante abastecida através da produção familiar. A mastite bovina é frequente nos rebanhos leiteiros ocasionando grandes perdas econômicas para a indústria leiteira. A mastite é ocasionada pela inflamação do tecido mamário por agentes físicos, químicos ou por patogênos. Staphylococcus aureus é um importante patógeno causador de mastite bovina subclínica cronica. O sucesso da persistência deste patogéno no hospedeiro ocorre devido a uma série de fatores de colonização e virulência que esta bactéria possui. Está espécie bacteriana possui heterogeneidade genética e uma população caracterizada por cepas geneticamente diversificadas. A análise da variação genética é uma importante ferramenta para fins de estudos epidemiológicos. Para a realização da presente tese, foram estudadas 53 cepas de S.aureus oriundos do leite de vacas com mastite subclínica de seis fazendas em diferentes municípios do Estado do Rio de Janeiro. As 53 cepas de S. aureus foram submetidos a detecção dos perfis de virulência, tipagem do gene agr e do spa. Das 53 cepas de S. aureus, 17 cepas foram selecionadas através dos perfis de virulência (previamente estabelecidos) para serem submetidas às técnicas de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), Tipagem da Sequência Multilocus (MLST), avaliação fenotípica da produção de biofilme, suscetibilidade a antimicrobianos e a detecção genotípica de resistência a meticilina. Foi possível detectar 58,5% (31/53) de isolados positivos para o gene icaA; 83% (44/53) para o gene icaD; 66% (35/53) para o gene fbnA; 26,4% (14/53) positivos para o gene fbnB; 3,7% (2/53) para o gene cap8; 92,4% (49/53) para o gene hlA e 84,9% (45/53) para o gene hlB. Nenhum isolado foi positivo para o gene cap5. A partir destes resultados foi possível estabelecer 18 diferentes perfis. Através da técnica de PFGE foi possível observar grande heterogeneidade genética e ausência de cepas clonais.A análise fenotípica da produção de biofilme, demostrou a prevalência de cepas com baixa expressão fenotípica. A maioria dos isolados (67,9%- 36/53) foi classificada como grupo II do sistema agr. A tipagem do gene spa evidenciou 12 diferentes tipos nos 53 isolados testados, sendo prevalente o spa tipo 605 (54,7%- 29/53). A técnica de tipagem MLST gerou cinco tipos diferentes de ST/CC, sendo prevalente o ST/CC 126 (64,7%-11/17). As cepas testadas foram resistentes aos antibióticos ciprofloxacina, eritromicina e penicilina. Não foi possível detectar a presença de nenhuma cepa MRSA no presente estudo.