Caracterização fenotípica e genotípica de fatores de virulência e resistência à oxacilina em Staphylococcus spp. coagulase-positivos isolados de mastite bovina

Abstract

O presente estudo foi conduzido para caracterizar feno-genotipicamente os fatores de virulência e perfil de resistência aos antibióticos, especificamente à oxacilina, de espécies de Staphylococcus spp. coagulase-positivos isolados de amostras de leite de vacas com mastite. Do total de 150 isolados, foram identificadas as espécies S.aureus, S.intermedius e S.hyicus. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resistência à penicilina e ampicilina e distintos antibiotipos foram identificados, sendo o de sensibilidade a todos os antibióticos o prevalente. Um total de 94,6% e 70,7% foi positivo para a produção de betalactamases e presença do gene mecA, respectivamente. O gene femA foi detectado em 80,9% dos isolados mecA positivos. Os isolados apresentaram distintos padrões de crescimento nos testes de suscetibilidade à oxacilina. Os testes de ágar screen e a avaliação da microdiluição em placa, apresentaram valores consideráveis de sensibilidade e especificidade quando os isolados foram considerados como um único grupo (Staphylococcus spp coagulase-positivos) ou quando as espécies foram discriminadas, respectivamente. A adição de 4% de NaCl no meio de cultura pode ter efeito no aumento da sensibilidade do teste de difusão em disco utilizando o disco de oxacilina e o teste de difusão em disco apresentou melhor capacidade na detecção dos isolados resistentes à oxacilina com discos de cefoxitina. Um total de 80% dos S.aureus foi classificados como MRSA e apresentaram resistência superior a 15% à associação de ampicilina e sulbactam, vancomicina e gentamicina. Quanto aos fatores de virulência, a técnica da microplaca revelou 82,8% de isolados produtores de slime e a intensidade da produção não foi associada à presença dos genes icaA e icaD. Em adição, o ágar contendo vermelho congo apresentou eficácia na detecção do isolados não produtores de slime . Em todos os isolados hemolíticos foi detectada a beta hemolisina e 11,3% dos não-hemolíticos produziram hemolisinas na presença da cepa beta-hemolítica, indicando a presença da delta hemolisina. Foram realizadas as amplificações dos genes spaA, coa e agr em todos os S.aureus. O gene spaA, que codifica a região X, foi positivo em todos isolados, revelou um único amplicon para cada isolado e apresentou polimorfismo sendo o tamanho prevalente o de 315pb. A amplificação do gene coa apresentou três tipos polimórficos distintos, com único amplicon para cada isolado e o perfil prevalente foi o de 900 bp. A amplificação do gene agr resultou em amplicons com 350 e 550 pb em 74% dos isolados. A prova de biotipificação revelou o ecovar bovino como o prevalente nos S.aureus. Foram identificados 7 S.aureus que apresentaram os mesmos perfis dos genes coa, spaA, agr, antibiotipos e ecovares, sendo 4 pertencentes mesma propriedades e 3 provenientes de propriedades distintas.