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Tipo do documento: Dissertação
Título: Diagnóstico por PCR e estudo da variabilidade genética de Leishmania (Leishmania) chagasi em diferentes sítios anatômicos de cães naturalmente infectados
Otros títulos: PCR diagnosis and study of the genetic variability of Leishmania (Leishmania) chagasi in distinct anatomic sites of naturally infected dogs.
Autor: Pires, Marize Quinhones
Orientador(a): Bittencourt, Vânia Rita Elias Pinheiro
Primeiro coorientador: Pacheco, Raquel da Silva
Primeiro membro da banca: Madeira, Maria de Fátima
Segundo membro da banca: Bonfim, Teresa Cristina Bergamo
Palabras clave: leishmaniose visceral canina;LSSP-PCR;RFLP-PCR;canine visceral leishmaniasis;LSSSP-PCR;RFLP-PCR
Área(s) do CNPq: Medicina Veterinária
Idioma: por
Fecha de publicación: 28-jun-2010
Editorial: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citación: PIRES, Marize Quinhones. Diagnóstico por PCR e estudo da variabilidade genética de Leishmania (Leishmania) chagasi em diferentes sítios anatômicos de cães naturalmente infectados. 2010. 46 f. Dissertação (Programa Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias) - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica.
Resumen: Na leishmaniose visceral (LV), uma doença de potencial zoonótico e de ampla distribuição, o cão possui um papel bem sedimentado, sendo considerado um importante reservatório doméstico de Leishmania (Leishmania) chagasi nas Américas. Nestes animais, a distribuição do parasita pode ser extensa, alcançando órgãos como baço, fígado, lifonodos, pele e medula óssea. É o parasitismo de pele íntegra que faz do cão um elo importante na cadeia epidemiológica da doença. Embora a pele seja um sítio de investigação diagnóstica, não se conhece a variabilidade clonal da distribuição de subpopulações de L.(L.) chagasi neste e nos demais órgãos nos cães infectados. O principal objetivo do presente trabalho foi utilizar o ensaio da PCR para o diagnóstico específico da infecção e, investigar através de técnicas moleculares (LSSP-PCR e RFLP-PCR) a variabilidade genética intraespecífica de L.(L.) chagasi presente em fragmentos de pele íntegra, lesão cutânea, baço, fígado e linfonodos de cães naturalmente infectados do Município do Rio de Janeiro. De um total de 17 cães, 106 fragmentos teciduais foram analisados. Destes, 66 (62,26%) foram PCR positivos com os iniciadores D1/D2 específicos para as espécies do complexo L. donovani.. O maior percentual de detecção foi observado em fragmentos de linfonodos cervical (17/17, 100%) e poplíteo (17/17, 100%), seguido do baço com o percentual de 76,47% (13/17) e, em pele íntegra com 12 biopsias positivas em 17 (70,59%). A técnica de RFLP-PCR, associada aos ensaios de PCR, foi escolhida para confirmar a presença de DNA de L. (V.) braziliensis em lesões cutâneas e de L. (L.) chagasi em fragmentos de órgãos internos de dois cães, confirmando dois casos caninos de coinfecção no Município do Rio de Janeiro. Através da técnica de LSSP-PCR foi possível evidenciar que a infecção canina por L. (L.) chagasi pode manisfestar-se com disseminação parasitária e tropismo tissular por populações do parasita geneticamente diferenciadas. Não foi possível, no entanto, observar associação entre determinado perfil genético e o estado clínico do animal. O presente estudo contribuiu para um melhor entendimento da dinâmica da infecção na LV canina no que diz respeito ao tropismo diferenciado e ao envolvimento de subpopulações parasitárias de L. (L.) chagasi. Além disso, o estudo permitiu rastrear a variabilidade genética de algumas cepas circulantes na população canina das áreas investigadas.
Abstract: Visceral leishmaniasis is a potentially zoonotic disease with a broad geographical distribution. Dogs play a crucial role in its epidemiology, being considered as important domestic reservoirs for Leishmania (Leishmania) chagasi in the Americas. In these dogs, L. (L.) chagasi presents an extensive tissue distribution, being found in organs such as the spleen, the liver, lymph nodes, skin and bone marrow. Despite diagnostic investigation is usually performed in the skin, the clonal variability of L. (L.) chagasi subpopulations in the skin (and other affected organs) is not well understood. The main objective of this study was to: i) perform specific molecular diagnosis of leishmaniasis through PCR, and ii) assess intraspecific genetic variability of distinct L. (L.) chagasi strains characterized in different host tissues by two molecular techniques (LSSP-PCR and RFLP-PCR). Fragments of normal skin, cutaneous lesions, spleen, liver and lymph nodes obtained from naturally infected dogs living in the state of Rio de Janeiro were analyzed. One hundred six tissue fragments obtained from 17 dogs were studied. Through PCR, 66 (62.26%) of the fragments proved positive utilizing specific primers D1/D2 to species belonging to the L. donovani complex. Cervical and popliteous lymph nodes presented the highest rate of positivity (100%, 17/17). Spleen and normal skin presented detection rates of 76.47% (13/17) and 70.59% (12/17), respectively. RFLP-PCR was performed in order to confirm the presence of L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi DNA in cutaneous lesions and in internal organs, respectively, detecting two cases of co-infection with both parasites. Through LSSP-PCR it was possible to demonstrate that L. (L.) chagasi infection courses with parasitic spread and different tissue tropism of genetically distinct subpopulations of the parasite. Nevertheless, it was not possible to correlate specific genetic profiles with distinct clinical outcomes. The present study contributed to understand the dynamics of L. (L.) chagasi infection, concerning tissue tropism and the role of distinct parasitic subpopulations of L. (L.) chagasi. In addition, it was possible to assess the genetic variability of some strains circulating in dogs in the studied area.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11736
Aparece en las colecciones:Mestrado em Ciências Veterinárias

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