Cultura primária in vitro de células embrionárias de Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Amblyomma cajennense como substrato para cultivo de Borrelia burgdorferi

Abstract

Células embrionárias de carrapatos mantidas in vitro constituem uma importante ferramenta para cultivo e estudo da biologia de Borrelia burgdorferi. A espiroquetas B. burgdorferi é o agente etiológico da borreliose de Lyme nos EUA e Europa, onde é transmitida por carrapatos do gênero Ixodes. O objetivo deste trabalho foi cultivar in vitro Borrelia burgdorferi (Cepa Americana G39/40) em cultura primária de células embrionárias dos carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Amblyomma cajennense. A partir da cultura primária de células embrionárias de R. (Boophilus) microplus foram realizados subcultivos mantidos com meio Leibovitz s L-15 livre de antibiótico, que posteriomente foi trocado pelo meio Barbour-Stoener-Kelly (BSK). Após a adição do BSK na cultura, inoculou-se B. burgdorferi e também em Tubo de Leighton (TL) com BSK livres de células (controle), numa concentração final de 6x106 espiroquetas/mL. As células embrionárias de A. cajennense foram inicialmente cultivadas em meio L-15 com antibiótico, o qual foi substituído pelo BSK. Posteriormente, inoculou-se 1,1x107 espiroquetas/mL cultivadas em meio BSK, e também em TL controle livre de células. Todos os cultivos foram incubados em estufa bacteriológica a 34ºC. O desenvolvimento dos cultivos foram observados em microscópio de contraste de fase invertido, assim como as contagens de B. burgdorferi realizados em câmara de neubauer. As lamínulas dos TL foram coradas com Giemsa. Foi constatado pela observação em microscópio de contraste de fase invertido a sobrevivência, aderência e multiplicação de B. burgdorferi, nas células embrionárias de R. (Boophilus) microplus e A. cajennense. Não houve diferenças na contagem final de espiroquetas cultivadas em células de R. (Boophilus) microplus quando comparada ao controle livre de células, mas sobre células de A. cajennense o valor total de aproximadamente 1,9x107 espiroquetas/mL, e enquanto no tubo controle livre de células foi 1x106 espiroquetas/mL. O cultivo de células do carrapato R. (Boophilus) microplus e A. cajennense têm potencial para ser utilizado como substrato para cultivo de B. burgdorferi e para estudo de seu desenvolvimento.