Identificação de enterobactérias através da técnica de MALDI-TOF MS e compreensão da disseminação destes agentes em ambiente de produção leiteira

Abstract

A mastite bovina afeta negativamente a produção de leite dificultando a recuperação dos níveis de produção total das propriedades leiteiras, levando a perdas econômicas consideráveis. Esta redução no percentual da produção de leite pode estar associada ao agente patogênico específico que causou a infecção, sendo as enterobactérias frequentemente responsáveis pela mastite ambiental. Estes microrganismos são preferencialmente encontrados no habitat normal dos animais como locais que apresentam esterco, urina, barro e camas orgânicas. Os testes fenotípicos estão entre os métodos disponíveis atualmente utilizados para identificar as enterobactérias; no entanto, eles podem ocasionalmente identitificar erroneamente algumas espécies apesar dos múltiplos ensaios realizados. Além disso, a demora na sua execução pode tardar a antibioticoterapia realizada em campo. Por outro lado, a técnica de MALDI-TOF MS tem atraído a atenção pela sua identificação precisa dos vários microorganismos em nível de espécie. No presente estudo, um total de 183 enterobactérias foram isoladas a partir de amostras de leite (n=47) e fezes colhidas de vacas em lactação (n=94); amostras de água (n=23) e na linha de ordenha (n=19) em uma propriedade situada no Rio de Janeiro. A proposta foi utilizar a técnica de MALDI-TOF MS como um método eficaz de identificação bacteriana de enterobactérias e descrever a permanencia destes microrganismos no ambiente de produção leiteira. A técnica proteômica confirmou 92,9% (170/183) das espécies de enterobactérias identificadas pelos testes bioquímicos convencionais. O sequenciamento do gene gyrB, realizado em oito das 13 enterobactérias que apresentaram identificação discordante, confirmou em 100% o resultado da técnica proteômica, que foi utilizada como metodologia de referência no presente estudo. O gênero Enterobacter foi o mais discordante pelo método bioquímico (76,9%, 9/13). A E.coli foi a espécie predominante (83%, 152/183) em todas as amostras avaliadas, sendo que o leite bovino apresentou maior diversidade de enterobactérias. Não foi detectada a presença de Salmonella spp. nas amostras de fezes bovinas e todas as amostras de água dos diferentes pontos de coleta da propriedade apresentaram padrões microbiológicos inaceitáveis. Foram isoladas enterobactérias das mãos e cavidades nasal dos ordenhadores, bem como nas ordenhadeiras mecânicas utilizadas na propriedade. Estes dados visam contribuir de forma significativa para a caracterização das enterobacterias bem como para a compreensão e sua descrição no ambiente de produção leiteira, auxiliando no diagnóstico preciso dos possíveis agentes envolvidos na mastite bovina bem como na implementação de medidas profiláticas devidamente direcionadas.