Isolamento e caracterização de Cyniclomyces guttulatus (Robin) Van Der Walt e Scott (1971) de cães procedentes da Barra da Tijuca, Rio de Janeiro, RJ

Abstract

A levedura, Cyniclomycesguttulatus é um ascomiceto e tem sido reconhecida como um componente da microbiota natural de coelhos e outros herbívoros. Mais recentemente, uma possível associação entre esta levedura e doenças gastrintestinais em cães tem sido relatada por pesquisadores na Europa, EUA, Japão e Brasil. O presente estudo combinou métodos de análises morfológica e molecular (PCR-RFLP e sequenciamento de nucleotídeos), para examinar culturas de C. guttulatus recuperados de coelhos brasileiros (15 isolados) e cães (7 isolados), com o objetivo de desenvolvimento de um método para a identificação diferencial de C. guttulatus e melhorar o conhecimento existente sobre a biologia desse organismo. O exame microscópico e macroscópico das colônias isoladas em combinação com análise do zimograma (testes de fermentação de carboidratos), não foi capaz de fornecer uma identificação definitiva para as culturas suspeitas. As análises in silico de polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP) de produtos de PCR virtuais (correspondentes ao domínio D1/D2 do gene 26S RNA ribossomal de C.guttulatus e outras espécies de levedura conhecidas como associadas a cães), indicou que a digestão com a enzimas de restrição Ddel, HaeIII e MspI permitiria a identificação diferencial de C. guttulatus. As análises das digestões in vitro de produtos de PCR confirmaram as previsões das análises in silico e demonstrou que a identificação diferencial de C.guttulatus poderia ser feita usando apenas duas enzimas (DdeI e MspI). O sequenciamento dos produtos de PCR do domínio D1/D2 demonstraram a presença de variações substanciais de nucleotídeos nas culturas analisadas e estas foram divididas em três grupos, denominados de sequências tipos (ST's). Dois destes grupos estavam estreitamente relacionados uns aos outros. O terceiro tipo de sequência mostrou grande variação de nucleotídeos e pode representar uma nova espécie ou subespécie dentro do gênero Cyniclomyces