Aplicação de Técnicas de REP-PCR na Análise de Isolados de Staphylococcus aureus em amostras de Mastite Bovina.

Abstract

O Staphylococcus aureus é um importante agente causador de mastite bovina. Está espécie bacteriana possui heterogeneidade genética e uma população caracterizada por estirpes geneticamente diversas. A análise da variação genética é uma importante ferramenta para fins de estudos epidemiológicos. No presente estudo, foi avaliada a diversidade genética de 56 Staphylococcus aureus isolados de leite bovino mastítico em sete propriedades da região Sul- Fluminense do Rio de Janeiro através das técnicas de ERIC e (GTG)5-PCR. Foram testados 12 protocolos de ERIC-PCR, sendo selecionados três com maior poder discriminatório. Com o protocolo 01, obteve-se 6 agrupamentos com um poder discriminatório de 0,863. Observou-se a dispersão de isolados com similaridade genética em diferentes propriedades e presença de cepas clonais circulantes dentro da mesma propriedade e em propriedades de municípios diferentes. O protocolo 02 foi gerado afim de melhorar a performance da técnica e propiciou a obtenção de15 agrupamentos com um poder discriminatório de 0,961, onde foi observada grande diversidade gênica e variabilidade entre os isolados. No entanto, o protocolo 02 não apresentou reprodutibilidade. Desse modo, foi testado um terceiro protocolo, obtendo-se 16 agrupamentos com um poder discriminatório de 0,96. A partir deste, também observou-se a dispersão de isolados com similaridade genética em diferentes propriedades e presença de cepas clonais circulantes em propriedades de municípios diferentes. Para a execução da técnica de (GTG)5- PCR foram testados oito protocolos,elegendo-se apenas um de maior poder discriminatório.Este protocolo gerou 15 agrupamentos com um poder discriminatório de 0,957. Observou-se a dispersão de isolados com similaridade genética em diferentes propriedades e presença de cepas clonais circulantes em propriedades de municípios diferentes. Porém as tentativas subsequentes de execução da técnica não foram bem sucedidas o que indica a necessidade de ajustes em sua padronização em nosso laboratório de maneira a garantir que, uma vez otimizada, possa gerar resultados confiáveis e reprodutíveis. Os resultados obtidos foram comparados com uma tipagem molecular prévia através do PFGE que gerou 6 perfis genéticos distintos em 19 isolados testados. Apesar de produzirem um número elevado de perfis genéticos e um bom poder discriminatório, estas técnicas apresentaram pouca reprodutibilidade, especialmente quando comparadas com a técnica de PFGE.