Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/13543
Tipo do documento: Dissertação
Título: Análise molecular da inoculação a campo do fungo micorrízico arbuscular (FMA) Glomus clarum CNPAB5 em plantas de milho, crotalária e batata-doce
Otros títulos: Molecular analysis of the inoculation at field of the arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) Glomus clarum CNPAB5 in maize plants, sunn hemp and sweet potato
Autor: Azevedo, Gabriel Corradi
Orientador(a): Souza, Francisco Adriano de
Primeiro coorientador: Gomes, Eliane Aparecida
Primeiro membro da banca: Seldin, Lucy
Segundo membro da banca: Medici, Leonardo de Oliveira
Palabras clave: Detecção Molecular;Polimorfismo;rDNA;Molecular detection;polymorphism
Área(s) do CNPq: Biologia Geral
Idioma: por
Fecha de publicación: 15-oct-2010
Editorial: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde
Programa: Programa de Pós-Graduação em Fitossanidade e Biotecnologia Aplicada
Citación: AZEVEDO, Gabriel Corradi. Análise molecular da inoculação a campo do fungo micorrízico arbuscular (FMA) Glomus clarum CNPAB5 em plantas de milho, crotalária e batata-doce. 2010. 62 f. Dissertação (Mestrado em Fitossanidade e Biotecnologia Aplicada) - Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, RJ, 2010.
Resumen: A maioria das famílias de plantas estabelece simbiose com fungos micorrízicos arbusculares (FMA). Dentre os FMA, espécies de Glomus se destacam como promotoras do crescimento de plantas cultivadas e predominam em solos agrícolas brasileiros, dentre essas o Glomus clarum. No entanto, estudos relativos à inoculação extensiva à campo e persistência do FMA inoculado são escassos. O objetivo desse trabalho foi avaliar, através de PCR-DGGE e sequenciamento, a capacidade de estabelecimento e a persistência da estirpe Glomus clarum CNPAB5 após sua inoculação à campo, bem como verificar o poder dessa técnica de fingerprint na detecção de alterações temporais e espaciais na comunidade de espécies do gênero Glomus . Plantas de milho e crotalária foram inoculadas com quatro doses de inóculo (0, 300, 900 e 1800 esporos/m linear de sulco de plantio) e após cultivo, nas mesmas parcelas, foi plantada batata-doce em rotação. O experimento foi conduzido em blocos ao acaso com quatro repetições. Visando a detecção molecular da estirpe introduzida por PCR-DGGE, inicialmente, a capacidade de discriminação de espécies do gênero Glomus foi avaliada utilizando 17 estirpes pertencentes a 9 espécies. Parte do 18S rDNA, incluindo a região V9, até a ITS2 foram amplificadas utilizando-se três combinações de iniciadores (NS7-GC/ F1Ra, NS7-GC/ITS-2 e GLOM1310-GC/ITS-2). Praticamente todas as estirpes apresentaram perfis distintivos e com múltiplas bandas, principalmente quando amplificada a região ITS, indicando variação intraespecífica entre as cópias do rDNA nas regiões amplificadas e capacidade de discriminação das estirpes por PCR-DGGE. Fragmentos obtidos com os iniciadores NS7-GC/ITS-2 foram escolhidos para as análises do experimento de campo. Os perfis obtidos das raízes não permitiram diferenciar os tratamentos, no entanto o DGGE indicou variação temporal, espacial e com o plantio da batata-doce em rotação na estrutura da comunidade de Glomus. Em relação a detecção e acompanhamento do FMA inoculado essa técnica de fingerprint não se mostrou adequada, uma vez que, o padrão do G. clarum não foi claramente identificado nas amostras de milho e crotalária inoculadas, bem como na batatadoce plantada em rotação. A comparação das sequências de raízes inoculadas com 1800 esporos de G. clarum CNPAB5 com sequências depositadas no GenBank indicaram a presença de G. clarum, porém, como somente foi realizado o sequenciamento das raízes inoculadas com a maior dose de inóculo, aliado ao fato de que essa espécie também foi encontrado nos solos dos tratamentos não inoculados, não se pode afirmar que o fungo inoculado foi capaz de colonizar e persistir no sistema após sua inoculação.
Abstract: Most plant families establishing symbiosis with arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). Among the AMF, Glomus species stand out as growth promoter of cultivated plants and predominate in Brazilian crop soils, among those the Glomus clarum. However, studies related to extensive field inoculation and persistence of the inoculated AMF are scarce. The aim of this study was to evaluate, by PCR-DGGE and sequencing, the ability of establishment and persistence of Glomus clarum CNPAB5 strain after your inoculation at field and as verify the power of this fingerprint technique to detect temporal and spatial changes in community of species of the genus Glomus. Maize plants and sunn hemp were inoculated with four doses of inoculum (0, 300, 900 and 1800 spores / linear meter of furrow) and after cultivation, in the same plots was planted sweet potato in rotation. The experiment was conducted in a randomized block design with four repeats. With the aim of the molecular detection of the strain introduced by PCRDGGE, initially, the ability to discriminate species of this genus was evaluated using 17 strains that belong to 9 species. Part of the 18S rDNA, including the V9 region until the ITS2 was amplified using three combinations of primers (NS7-GC / F1Ra, NS7-GC/ITS-2 and GLOM1310-GC/ITS-2). Almost all strains showed distinctive profiles and with multiple bands, especially when amplified ITS region, indicating intraspecific variation among rDNA copies in the amplified regions and capacity of discrimination of the strains by PCR-DGGE. The fragments obtained with the primers NS7-GC/ITS-2 were chosen for the analysis of field experiment. The profiles obtained from the roots did not vary between treatments, but the DGGE showed temporal variation, spatial and with the planting of sweet potato in rotation on the community structure of Glomus. The profiles obtained from the roots did not vary between treatments, but the DGGE showed temporal variation, spatial, and with the planting of sweet potato in rotation on the community structure of Glomus. The profiles obtained from roots did not allow differentiate the treatments, it is not possible to clearly detect the inoculated AMF. The DGGE showed temporal variation, spatial, and with the planting of sweet potato in succession to maize and sunn hemp in the structure of the community of Glomus. Regarding the detection and monitoring of AMF inoculated this fingerprint technique was not adequate, since the pattern of G. clarum not been clearly identified in samples of maize and sunn hemp inoculated as well as sweet potatoes planted in rotation. Comparing the sequences of roots inoculated with 1800 spores of G. clarum CNPAB5 with GenBank sequences indicated the presence of G. clarum, however, as only the sequencing was carried out of the roots inoculated with the higher dose of inoculum, coupled with the fact that this species was also found in non-inoculated soil treatments, cannot say that the inoculated fungus was able to colonize and persist in the system after inoculation.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/13543
Aparece en las colecciones:Mestrado em Fitossanidade e Biotecnologia Aplicada

Se for cadastrado no RIMA, poderá receber informações por email.
Se ainda não tem uma conta, cadastre-se aqui!

Ficheros en este ítem:
Fichero Descripción TamañoFormato 
2010 - Gabriel Corradi Azevedo.pdf2010 - Gabriel Corradi Azevedo4.89 MBAdobe PDFVista previa
Visualizar/Abrir


Los ítems de DSpace están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.