Transmissibilidade do fitoplasma do superbrotamento do chuchuzeiro (ChWBIII) e variabilidade de fitoplasmas associados a outras espécies botânicas

Abstract

Fitoplasmas são procariotos sem parede celular associados com inúmeras enfermidades de espécies de plantas no mundo. Esses patógenos na natureza são transmitidos por insetos que se alimentam do floema das plantas. Como os fitoplasmas não podem ser cultivados in vitro empregam-se técnicas moleculares para sua diganose e caracterização No Brasil, o superbrotamento do chuchuzeiro é uma doença associada ao fitoplasma ChWBIII, que pode causar redução da qualidade de frutos de chuchu. O ChWBIII tem outras espécies hospedeiras naturais, da família Cucurbitaceae, sendo a principal dessas, melão-de-São-Caetano (Momordica charantia). O presente trabalho teve como objetivos: (a) determinar a transmissibilidade do ChWBIII por métodos experimentais para vinca (Catharanthus roseus); (b) estudar a sintomatologia exibida por C. roseus infectado com o fitoplasma ChWBIII; (c) avaliar duas diferentes estratégias de desidratação de tecido vegetal para a detecção de fitoplasmas de plantas naturalmente doentes de chuchuzeiro, melão-de-São-Caetano e vinca; (d) estudar a possível presença e a transmissão do fitoplasma ChWBIII às sementes de M. charantia; e, (e) verificar a variabilidade de fitoplasmas em milho, maracujá, poinsétia e C. roseus. A patogenicidade e a transmissibilidade do ChWBIII, mediante Cuscuta e enxertia, foi verificada pela sintomatologia em C. roseus e por PCR usando primers universais específicos para o 16S rDNA de fitoplasmas. Posteriomente, a identidade do ChWBIII em plantas doadoras de melão-de-São-Caetano, em Cuscuta e em C. roseus foi confirmada por análise de seqüências. Amostras de plantas doentes de melão-de-São-Caetano, vinca e chuchuzeiro submetidas à dessecação com sílica gel, continham 16S rDNA de fitoplasma, o qual foi amplificado por PCR com primersP1/P7 e reamplificado em nested PCR com os primers F2n/R2, fornecendo produtos de aproximadamente 1.2 kb. Testes moleculares demonstraram a presença do fitoplasma ChWBIII em sementes de M. charantia de frutos sintomáticos, obtidos de plantas com superbrotamento do melão-de-São- Caetano . O emprego de primers específicos ao grupo 16SrIII confirmou a identificação do fitoplasma associado à sementes como pertencente a esse grupo, o que foi corroborado através do seqüenciamento. A análise das seqüências revelou que o fitoplasma associado a sementes de melão-de-São-Caetano é o ChWBIII. A presença de fitoplasmas em plantas sintomáticas de milho, maracujá, poinsétia e C. roseus foi detectada através de PCR e nested PCR com iniciadores universais. Os fitoplasmas isolados de maracujá, poinsétia e C. roseus foram inseridos no grupo 16SrIII, de acordo com nested PCR com primers específicos a esse grupo. Análise das seqüências dos fitoplasmas de maracujá e de C. roseus confrrmou a identidade dos mesmos, revelando 99% de homologia com o ChWBIII. Com a presente pesquisa determinou-se: (a) a transmissibilidade de ChWBIII mediante a transmissão inversa por Cuscuta para a hospedeira experimental C. roseus e, também mediante a indexação biológica; (b) a sintomatologia exibida por C. roseus infectado com o fitoplasma ChWBIII; (c) a viabilidade do uso de tecidos preservados de chuchuzeiro, melão-de-São-Caetano e vinca, para a detecção de fitoplasmas, indicando a possibilidade de uso desse tipo de amostras para outras espécies botânicas afetadas por fitoplasmoses; (d) a presença de fitoplasmas nas sementes de frutos sintomáticos provenientes de plantas de melão-de-São-Caetano infectadas com o ChWBIII, o que sugere a possível transmissão do fitoplasma da planta mãe para as sementes; (e) a diversidade de plantas hospedeiras de fitoplasmas no Brasil, que foi verificada em milho, maracujá, poinsétia e C. roseus. Os resultados obtidos no presente estudo possibilitam o maior entendimento epidemiológico das enfermidades incitadas por fitoplasmas e podem auxiliar na descoberta de insetos vetores e de plantas hospedeiras alternativas, favorecendo o estabelecimento de estratégias de controle dessas doenças.