Caracterização celular da hemolinfa e avaliação da resposta celular após exposição in vitro ao fluazuron de fêmeas ingurgitadas de Amblyomma sculptum

Abstract

O objetivo deste trabalho foi caracterizar quantitativamente e morfologicamente os hemócitos presentes na hemolinfa de fêmeas ingurgitadas de A. sculptum e avaliar a resposta imune celular deste após a exposição in vitro ao fluazuron. Para caracterização celular hemolinfática, a hemolinfa foi coletada através de uma perfuração da cutícula na parte dorsal e posteriormente colocada diretamente em lâmina de vidro para confecção dos esfregaços que foram corados por solução de Giemsa. Foi realizada a contagem diferencial de hemócitos com base na morfologia observada em microscópio óptico em aumento de 1000 vezes, através da identificação das 100 primeiras células encontradas no esfregaço corado. A avaliação dos tamanhos celulares e de suas estruturas foi realizada através da leitura das lâminas confeccionadas para contagem diferencial dos hemócitos com o auxílio de um Microscópio óptico Olympus modelo BX51 com luz polarizada, acoplado a uma câmera da mesma marca de modelo UC30. A contagem total de hemócitos foi realizada com auxílio de microscópio óptico e Câmara de Neubauer. Para avaliação da resposta celular após a exposição in vitro ao fluazuron foram realizados testes de imersão com as fêmeas ingurgitadas de A. sculptum nos grupos controle (com apenas os diluentes) e tratados (7,81, 250 e 4000 µg.mL-1). Foi coletada hemolinfa para contagem total e diferencial de hemócitos nos tempos de 24h e 48h após a imersão. A caracterização celular revelou que o carrapato A. sculptum apresenta média de 1024 céls/µL e seis tipos celulares: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos, adipohemócitos e oenocitóides que se distribuem de forma distinta na hemolinfa, onde o granulócito foi o tipo mais frequente. O fluazuron foi capaz de realizar alterações celulares no carrapato A. sculptum promovendo a diminuição dos hemócitos totais na concentração de 4000 µg.mL-1 após 48h, assim como reduzir a frequência de granulócitos e aumentar a frequência de esferulócitos na contagem diferencial. Conclui-se que a partir da microscopia óptica foi possível determinar o valor médio do total de hemócitos circulantes, classificar morfologicamente seis tipos celulares: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos, adipohemócitos e oenocitoides e determinar a frequência média de cada tipo na hemolinfa de A. sculptum. Além disso, o fluaruzon foi capaz de promover alteração celular na hemolinfa de fêmeas ingurgitadas de A. sculptum após exposição in vitro.