Produção de raízes transformadas geneticamente por infecção com Agrobacteríum rhizogenes em diferentes espécies vegetais.

Abstract

Este trabalho teve por objetivo a obtenção de raízes transformadas de espécies medicinais, conhecidas por produzirem algum tipo de metabólito especial, e já utilizadas com fins terapêuticos ou industriais. As raízes foram obtidas a partir da infecção das plantas com diferentes estirpes da bactéria Agrobacteríum rhizogenes. As espécies vegetais utilizadas foram Hissopus officinalis (hissopo), Anethum graveolens (aneto), Piper hispidinervium (pimenta-longa) e Ocimum basilicum (manjericão). Sementes dessas plantas foram esterilizadas e germinadas em condições assépticas, e as plântulas obtidas foram inoculadas por diferentes linhagens de Agrobacteríum rhizogenes (LBA, 8196, A4 e R1601). Foram avaliados os efeitos de diferentes métodos de inoculação e também a interação de cada linhagem de bactéria utilizada com as espécies vegetais na produção de raízes e calos transformados. Das raízes e dos calos produzidos foram feitos sub-cultivos. Os resultados mostram que o método mais eficiente para a inoculação é o baseado na imersão dos explantes em meio de cultura líquido, com a bactéria em crescimento, pois apresenta maior praticidade, menor índice de contaminação, maior taxa de infecção e o que causa menos danos aos explantes. Diferentes respostas morfogenéticas foram obtidas a partir de explantes inoculados com diferentes linhagens de Agrobacteríum rhizogenes. Para manjericão, duas variedades (manjericão-roxo Dark Opal e manjericão-verde folha fina) foram inoculadas com as linhagens LBA, A4 e 8196 da bactéria. Foram utilizados dois explantes, segmentos de caule e folhas. A inoculação com as linhagens LBA e 8196 de Agrobacteríum possibilitou redução no número de explantes de folha de manjericão-verde oxidados em relação ao controle e aqueles inoculados pela linhagem A4. Para manjericão-roxo, foi observado formação de raiz, sem formação de calo em 73,7% dos explantes de folha inoculados com a linhagem LBA. Para os explantes inoculados com linhagem 8196 observou-se formação indireta de raízes, ou seja, as raízes surgem após a formação de calos. Explantes controle, não inoculados, de ambas as variedades de manjericão produziram raízes. Esses dados mostram que as linhagens de Agrobacteríum interagem de maneira distinta com as variedades de manjericão utilizadas, fornecendo respostas morfogenéticas diferenciadas. Explantes de folha de aneto e hissopo, ao serem inoculados com as linhagens LBA e 8196 também apresentaram variação nas respostas morfogenéticas. Explantes de aneto inoculados com a linhagem 8196 apresentaram formação de massas de calos, enquanto que explantes inoculados com a linhagem LBA e explantes controle não formaram calos ou raízes. Para hissopo, a linhagem 8196 induziu à formação de calos, enquanto que os explantes inoculados com LBA e os explantes controle oxidaram sem apresentar nenhuma resposta. Esses calos produzidos apresentaram elevada taxa de crescimento nos sub-cultivos feitos em meio de cultura livre de hormônios. Explantes de folha de hissopo, manjericão e pimenta-longa, inoculados com a estirpe RI601, formaram raízes que apresentaram crescimento nos sub-cultivos subsequentes.