Ações da Terapia Fotodinâmica na organização óssea e nas expressões de T-bet em linfócitos Th1 e de iNOS em células osteoblásticas, quando aplicada em defeitos femorais de ratos

Abstract

O presente estudo investigou o uso da Terapia Fotodinâmica (PDT) nos contextos morfológico, inflamatório e imunológico durante o reparo ósseo em defeitos femorais realizados em ratos Wistar. Foram confeccionados dois defeitos diafisários equidistantes 1,16 cm um do outro, sendo todos aqueles distais, preenchidos por 10 μl do corante azul de metileno (AM) a 0,01%. Parte dos animais foi submetida à irradiação pela Laserterapia de Baixa Intensidade (LLLT) - ArGa, 660 nm, luz vermelha pulsátil, 40 mW e 2,3 J/cm2 - por intervalos de tempo distintos (20 s e 90 s), durante a cirurgia e em dias alternados. As análises ocorreram aos sete e 14 dias. Os blocos foram clivados em 4 μm e 5 μm e as lâminas submetidas tanto à imuno-histoquímica para T-bet e iNOS, como à coloração por Hematoxilina e Eosina e Picrosirius Red. Nas áreas de neoformação foram avaliados o número de células totais, o colágeno total, a densidade de número de osteócitos e a maturação do tecido ósseo, além das expressões do fator de transcrição T-bet em linfócitos T-helper 1 e da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) em células da linhagem osteoblástica. Amostras de cada grupo também foram avaliadas através de microscopia eletrônica de varredura. Os resultados demonstraram que o grupo LLLT 90 (97,55±7,942; P<0,0005) apresentou redução na contagem total de células em relação ao grupo Defeito ósseo (165,4±12,70), quando avaliado aos sete dias de tratamento, enquanto o grupo LLLT 90 + AM se destacou ao promover redução no número de células totais em ambos os períodos avaliados (113,7±10,21; P<0,0227 / 66,84±7,820; P<0,0001, respectivamente); os defeitos ósseos preenchidos por AM (P<0,0002) e aqueles irradiados por 90 s (p<0,0202) tiveram aumento significativo do colágeno total, quando comparados ao grupo Defeito ósseo, no sétimo dia de avaliação; foi observada redução significativa no número de osteócitos nos grupos LLLT 20 (8,865±4,198; P<0,0001) e LLLT 90 + AM (13,79±0,3622; P<0,0315), quando comparado ao grupo sem tratamento (20,47±1,896), no sétimo dia. A análise de microscopia eletrônica revelou variações na morfologia do tecido neoformado, com áreas com variados graus de porosidade e organização tecidual. Quanto ao número de linfócitos que expressaram T-bet por área de neoformação óssea, o grupo LLLT 90 (9,656±1,482; P<0,0026) foi o único que expressou aumento significativo. Já os grupos LLLT 90 e LLLT 90 + AM tiveram aumento na expressão de iNOS no primeiro período avaliado, sendo esta mais evidente no segundo grupo. Os resultados sugerem que a PDT, com AM, é capaz de promover melhor organização do tecido ósseo ao aumentar a expressão de iNOS em áreas de neoformação óssea de defeitos induzidos no fêmur de ratos Wistar de maneira precoce, no entanto ela não interferiu na expressão do fator de transcrição T-bet.