Utilização de diferentes técnicas para monitorar a colonização e estabelecimento de bactérias diazotróficas endofíticas em plantas de cana-de-açúcar

Abstract

O objetivo deste trabalho foi avaliar o estabelecimento das bactérias diazotróficas endofíticas BR 11504, BR 11335, BR 11115, BR 11281 e BR 11366 inoculadas em plantas de cana-de-açúcar cultivada em casa-de-vegetação e nas regiões produtoras de São Paulo e Rio Grande do Sul. Os sítios de colonização e infecção destas bactérias diazotróficas, foram identificados através do mapeamento da parte aérea de plantas de cana de açúcar, a fim de verificar qual região da planta apresenta maior população das bactérias provenientes do inoculante. Foram detectadas bactérias diazotróficas endofíticas em todas as regiões das plantas analisadas pelo método do Número Mais Provável (NMP), inclusive nas folhas. O mapeamento da comunidade de bactérias diazotróficas endofíticas não diferiu nas regiões do nó e entrenó ao longo da planta. O estabelecimento das bactérias diazotróficas endofíticas inoculadas em plantas de cana-de-açúcar, cultivadas nos estados de São Paulo e Rio Grande do Sul, foi avaliado pelas técnicas do NMP e PCR em tempo real (qPCR). Não foi observada diferença estatística na população de bactérias diazotróficas endofíticas entre os tratamentos controle e inoculado. A técnica de qPCR apresentou valores superiores de quantificação de bactérias diazotróficas endofíticas, quando comparada com a técnica de contagem dependente de cultivo NMP. O PCR em tempo real mostrou-se bastante preciso e sensível na detecção e quantificação de bactérias diazotróficas endofíticas, podendo ser utilizado em plantas de cana-de-açúcar cultivadas em condições de campo. A população de bactérias diazotróficas endofíticas variou durante o ciclo da cultura. A diversidade das bactérias diazotróficas presentes em variedades de cana-de-açúcar foi estudada utilizando a técnica de “nested-PCR” com iniciadores para o gene nifH. Foi realizada a confirmação do estabelecimento das bactérias do inoculante nos tecidos das plantas de cana-de-açúcar, através do uso de estirpes marcadas para resistência a antibióticos em variedades de cana crescidas em condições de casa de vegetação.