Metarhizium spp.: seleção de isolados, ação antimicrobiana e eficácia de formulações granulares no controle de Rhipicephalus microplus

Abstract

Metarhizium sp. é encontrado no solo e em raízes de plantas e a pastagem é um ambiente propício para o desenvolvimento desse entomopatogeno, tornando a rizosfera de forrageiras e a presença de hospedeiros como o carrapato Rhipicephalus microplus um nicho ecológico ideal. Porém, fatores bióticos e abióticos interferem na persistência fúngica, sendo fundamental selecionar bons isolados, considerar as interações ecológicas com outros microrganismos e formulá-los. Baseado nisso, o presente trabalho apresenta estudos aplicados ao gênero Metarhizium no controle de pragas. Foram avaliados: a tolerância térmica e a capacidade de diferentes isolados do fungo em colonizar tecidos da planta Vigna radiata; a expressão do gene de adesão na planta em diferentes substratos; o efeito antimicrobiano e acaricida do exsudato fúngico; e a eficácia de formulações granulares de microescleródios (MS) e blastosporos (BLS) para o controle R. microplus. No ensaio de tolerância térmica, suspensões conidiais foram expostas a 25ºC, 40°C e 45°C, por 2h, 4h, 8h e 12h, e posteriormente a germinação foi avaliada após incubação por 48h a 25 ± 1°C, para a atividade dos isolados no frio esses foram submetidos à temperatura de 5ºC durante 14 dias, selecionando assim os termotolerantes. Para o estudo de colonização endofítica, sementes, raiz, caule e folha de V. radiata foram tratadas com suspensões de diferentes isolados, e a colonização dos tecidos do vegetal foi avaliada. No ensaio de expressão gênica, após o cultivo do fungo sobre meio mínimo (MM), meio batata dextrose ágar (BDA) e sobre a planta, a expressão do Gene mad2 foi observada. Para avaliar o efeito do exsudato de Metarhizium sp. no carrapato e em bactérias, o líquido resultante da exsudação de colônias foi coletado e a partir do teste de difusão em disco sobre cepas de duas bactérias isoladas do solo e sobre cepas resistentes e sensíveis de Staphylococcus sp. e Escherichia coli foi avaliado. Para o efeito acaricida, o exsudato fúngico foi inoculado nas fêmeas do carrapato e parâmetros biológicos, mortalidade e resposta celular do artrópode foram avaliadas. Por último, no teste de eficácia de formulações granulares de MS e BLS, vasos contendo Urochloa decumbens foram tratados com os grânulos, e posteriormente fêmeas de R. microplus foram introduzidas. Foram avaliados, a mortalidade, o número de larvas infestantes, assim como a persistência do fungo no solo. Quanto aos resultados, no teste de tolerância térmica, todos os isolados de Metarhizium spp testados germinaram mais que 90% após 12h a 40 °C e após a incubação no frio. Foram considerados bons isolados, aqueles que não sofreram variação drástica na germinação ao longo do tempo de exposição. Ao avaliar a capacidade de colonizar V. radiata, todos os isolados testados foram capazes de colonizar raízes, caules e folhas, havendo variação na colonização dos diferentes tecidos. Quando o fungo se desenvolveu sobre a planta o gene mad2 foi mais expresso que em BDA, porem foi no MM que o gene foi mais expresso. O exsudato fúngico foi capaz de inibir o crescimento das cepas resistente e sensível de Staphylococcus spp., e afetou mais as cepas de bactérias isoladas do solo do que as demais quando comparadas entre si. O exsudato também afetou diretamente o carrapato, reduzindo a resposta celular, causando morte e diminuição da postura de ovos. As formulações granulares de M. robertsii mostraram-se eficazes em controlar o carrapato nas condições testadas e o isolado fúngico colonizou a rizosfera da de U. decumbens. Este estudo fornece dados sobre a aplicação de isolados de Metarhizium spp. no solo e contribui para futuras pesquisas e bioprospecção desse microrganismo.