Estudo morfológico, biológico e caracterização molecular de duas novas espécies de Trypanosoma oriundos de carrapatos naturalmente infectados

Abstract

Parasitos do gênero Trypanosoma são microrganismos unicelulares e flagelados que pertencem à família Trypanosomatidae. O presente estudo descreve pela primeira vez o encontro de dois isolados do gênero Trypanosoma, um infectando naturalmente o carrapato Rhipicephalus microplus e o outro infectando naturalmente o carrapato Amblyomma brasiliense. Ambos isolados foram caracterizados através de análises moleculares, morfométricas e biológicas. As culturas de Trypanosoma foram obtidas através do isolamento em linhagens celulares de IDE8 e mantidas meio de cultivo L15B, incubadas em estufas bacteriológicas a 30ºC. Os isolados obtiveram um bom rendimento de propagação em meio L15B nas temperaturas de 300C, 320C e 340C. A cultura permaneceu estável com mais de 14 passagens de propagação em cultura axênica com meio L15B à temperatura de 30ºC. A criopreservação da cultura do isolado apresentou viabilidade após descongelamento pelo armazenamento em nitrogênio líquido. Foi realizada a curva de crescimento e análise das formas evolutivas dos isolados em meio axênico e nas linhagens celulares IDE8 e DH82. A análise das sequências nucleotídicas obtidas com alvos dirigidos para a região 18S rDNA e 24Sα rDNA comprovaram a autenticidade dessas novas espécies. As sequências nucleotídicas descritas foram depositadas no Genbank. A microscopia eletrônica de varredura e análise morfométrica revelaram ampla diversidade morfológica das duas espécies denominadas Trypanosoma rhipicephalis sp. nov. cepa P1RJ e Trypanosoma amblyommi sp. nov. cepa C1RJ. A citometria de fluxo associada à microscopia de fluorescência comprovou a internalização de ambos os isolados de Tripanosomatídeos em células das linhagens IDE8 e DH82 mesmo com a inibição da fagocitose celular. Aspectos relacionados à patogenicidade, envolvimento com hospedeiros vertebrados, epidemiologia, ciclo evolutivo e mecanismos de transmissão ainda são desconhecidos. Portanto, serão necessários mais estudos para o conhecimento de aspectos do ciclo biológico de Trypanosoma rhipicephalis sp. nov. e Trypanosoma amblyommi sp. nov.