Seleção de isolados de Metarhizium anisopliae s.l. para o controle biológico de Rhipicephalus microplus a partir da caracterização morfológica e molecular e testes de patogenicidade

Abstract

Na tentativa de diminuir a utilização de produtos químicos e os danos por eles causados, novas alternativas para o controle de carrapatos vem sendo estudadas. O fungo Metarhizium anisopliae é um dos mais estudados em programas agropecuários de manejo de pragas, pois apresenta grande potencial acaricida. Baseado nisso, o presente estudo objetivou a caracterização morfológica, molecular e a avaliação da virulência de 30 isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. provenientes de diferentes regiões geográficas, hospedeiros ou substratos, com a finalidade de selecionar isolados mais virulentos para utilização em futuros programas de biocontrole de carrapatos. Inicialmente os isolados foram caracterizados morfologicamente para confirmação de sua identificação, também sendo avaliado o potencial de produção de conídios de cada isolado. As colônias estudadas apresentaram características morfológicas compatíveis com as descritas na literatura. O tamanho das colônias variou entre 29,66 mm e 51,33 mm de diâmetro. Houve variação no comprimento e na largura de conídios e fiálides num mesmo isolado, assim como a presença de fiálides agrupadas e solitárias. O potencial de produção de conídios foi variável entre os isolados, porém tanto o tamanho dos conídios quanto o diâmetro das colônias não influenciaram a produção de conídios. Numa segunda etapa do estudo, foi avaliada a virulência destes isolados sobre larvas de Rhipicephalus microplus tratadas com uma das quatro diferentes concentrações de conídios (105, 106, 107 ou 108 conídios/mL). Foi confirmada a ação letal dos isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. sobre larvas de R. microplus, geralmente ocorrendo de forma diretamente proporcional a concentração conidial dos tratamentos. A maioria dos isolados ocasionou a morte de metade da população de larvas com a concentração de 107 conídios/mL; os isolados mais virulentos apresentaram esta concentração letal com 106 conídios/mL, com percentuais médios de mortalidade de larvas próximos de 100% ao 20º dia após tratamento. Além disso, buscou-se avaliar a variabilidade genética destes isolados e sua relação com outras espécies do gênero Metarhizium através da análise de RFLP-PCR e do sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA. Não foi observado um padrão de especificidade para o agrupamento entre isolados oriundos de mesma região, hospedeiro ou substrato. Foi observada variabilidade genética entre os isolados que basicamente se agruparam em dois grupos. O isolado CG 344 mostrou-se geneticamente distante de todos os outros, mas de acordo com a comparação com sequências obtidas do “GenBank” mostrou-se relacionado ao gênero Metarhizium. Esta variação pode ser devido ao fato deste isolado ter sido poupado de processos que gerassem alterações morfológicas e moleculares, o que possivelmente contribuiu para a pequena variabilidade genética obsevada. O presente estudo possibilitou a detecção de isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. com elevada virulência para larvas de R. microplus, podendo ser considerados potenciais agentes no biocontrole desta espécie de carrapato, ressaltando a importância da utilização de ferramentas moleculares para identificação e caracterização destes isolados, contribuindo para a qualidade do produto, o sucesso de sua aplicação e o monitoramento de um isolado introduzido no ambiente com finalidade de controle biológico.