Cultivo de Borrelia burgdorferi e B. garinii (Spirochaetales:Spirochaetaceae): cinética de crescimento em diferentes meios de cultivo e técnicas de coloração

Abstract

No presente trabalho, foram utilizados 57 meios para cultivo de Borrelia burgdorferi Johnson, Schmid, Hyde, Steigerwalt & Brenner 1984, e 26 meios para cultivo de B. garinii Baranton, Postic & Saint Girons 1992. Nestes meios foram adicionadas diferentes substâncias, soros sanguíneos de diferentes espécies animais e vários pHs: 6,4; 6,5; 6,8; 7,0 e 7,5. Observou-se que as duas amostras tiveram um bom crescimento na maioria dos meios testados. Foi estudada a cinética de crescimento de B. burgdorferi e B. garinii, pelo período de 3 meses, utilizando os seguintes meios: 1) BSK adicionado de soro de coelho; 2) BSK adicionado de soro de suino; 3) BSK adicionado de soro de suino e 5 fluorouracil; 4) PMR; 5) CTB; 6) DUBOS; 7) Caldo Brucella e 8) BHI. Todos os meios foram preparados assepticamente e mantidos em tubos de ensaio com capacidade para 10 mL. Para cada meio de cultivo, o inóculo foi padronizado para conter no início, 102 espiroquetas para cada 0,1 mL de cultivo. O monitoramento do crescimento foi feito contando-se o total de espiroquetas em 0,1 mL do meio entre lâmina de microscopia com dimensões de 26 x 76 mm e lamínula com dimensões de 10 x 30 mm, tendo sido utilizado microscópio de campo escuro e aumento de 250X e 400X. A contagem foi realizada pelo período de 14 semanas, tendo sido diária nos primeiros 12 dias e semanal a partir desta data. Houve crescimento de B. burgdorferi e B. garinii, em todos meios testados, com melhor performance para BSK adicionado de soro de coelho, BSK xvi adicionado de soro de suino + 5 fluorouracil e meio CTB. Observou-se crescimento de B. burgdorferi a partir da 4ª semana atingindo o platô de crescimento entre a 8ª e 12ª semanas, quando ocorreu a exaustão do meio de cultivo. Para B. garinii, observou-se um ligeiro aumento do crescimento a partir da 6ª semana, atingindo um platô de crescimento entre a 9ª e 12ª semanas, e seguido da diminuição do mesmo. A B. burgdorferi após ser cultivada em meio de BSK, foi mantida viável em tubo nunc, adicionado de Glicerol a 80%, pelo período de 12 meses a temperatura de 0 ºC. Foi realizada, com sucesso, a coloração das duas amostras de Borrelia, utilizando os corantes cristal violeta, safranina, fucsina e verde brilhante.