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Tipo do documento: Tese
Título: Estudo de carrapatos associados com aves no entorno do tinguá, Nova Iguaçu, Rio de Janeiro, Brasil; detecção de Rickettsia spp., e o desenvolvimento de métodos moleculares para análise de interações carrapato-microrganismo
Otros títulos: Study of ticks associated with birds in the vicinity of Tinguá, Nova Iguaçu, Rio de Janeiro, Brazil; detecting Rickettsia spp., and the development of methods for the analysis of molecular interactions tickmicroorganism.
Autor: Santolin, Ísis Daniele Alves Costa
Orientador(a): McIntosh, Douglas
Primeiro coorientador: Famadas, Kátia Maria
Primeiro membro da banca: Ogrzewalska, Maria Halina
Segundo membro da banca: Szabó, Matias Pablo Juan
Terceiro membro da banca: Luque, José Luis
Quarto membro da banca: Santos, Huarrisson Azevedo
Palabras clave: Aves silvestres;Carrapato;Método de extração de DNA;RFLP;Rickettsia;wild birds;tick;DNA extraction method
Área(s) do CNPq: Medicina Veterinária
Idioma: por
Fecha de publicación: 22-sep-2014
Editorial: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citación: SANTOLIN, Ísis Daniele Alves Costa. Estudo de carrapatos associados com aves no entorno do tinguá, Nova Iguaçu, Rio de Janeiro, Brasil; detecção de Rickettsia spp., e o desenvolvimento de métodos moleculares para análise de interações carrapato-microrganismo. 2014. 122 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica - RJ, 2014.
Resumen: Carrapatos parasitos de aves silvestres podem servir como vetores deagentes patogênicos de grande importância para a saúde silvestre e coletiva. Assim, o presente estudo analisou a prevalência e intensidade de infestação de carrapatos em aves silvestres capturadas em três regiões de Mata Atlântica, com diferentes níveis de antropização, situada em Nova Iguaçu, estado do Rio de Janeiro, Brasil, com o objetivo de avaliar a relação entre a prevalência de infestação e áreas preservadas na região. As capturas foram realizadas no período de maio de 2011 a abril de 2012 onde foram capturadas 625 aves representadas por 98 espécies divididas em 26 famílias e sete ordens, totalizando 14,2% da riqueza das espécies de aves do estado. O total de 17,44% (n=109; 109/625) das aves capturadas estavam parasitadas por 458 carrapatos, sendo 88,2% (n=404; 404/458) no estágio de larva (LL) e 11,8% (n=54; 54/458) no estágio de ninfa. Dentre os ixodídeos coletados, 99% (n=453) eram do gênero Amblyomma: Amblyomma longirostre (LL= 345; NN= 34), Amblyomma nodosum (NN= 13), Amblyomma calcaratum (NN= 3), Amblyomma varium (NN= 2); Amblyomma coelebs (NN=1), Amblyomma naponense (LL= 1), Amblyomma ovale (LL=1) e Amblyomma sp. (LL= 53). O gênero Haemaphysalis sp. foi representado por quatro larvas e uma única ninfa, correspondendo a 1% dos carrapatos coletados. Além disso, foram relatadas novas espécies de aves hospedeiras no Brasil, o caso inédito de superinfestação por A. longirostre em Xiphorhynchus guttatus. Análises moleculares (sequenciamento do gene mitocondrial 16S DNAr), permitiram a validação da identificação morfológica ao nível de espécie de larvas de A. longirostre sem a necessidade de aplicação de métodos de clarificação comumente utilizados. A detecção e identificação de agentes patogênicos e de seus hospedeiros carrapatos dependem cada vez mais de métodos moleculares, que tem por princípio a extração do DNA do carrapato e do microrganismo abrigado por ele. Na tentativa de estandardização da extração do DNA de ixodídeos e de sua microbiota associada, o presente estudo comparou seis métodos de extração de DNA (Fervura em água estéril, InstaGene®, QIAamp® DNA Mini Kit, Fenol:clorofórmio, Terra de diatomácea e Hotshot modificado). Até o momento, amostras submetidas à extração com Kit e Fenol:clorofórmio apresentam melhores resultados (em termos de quantidade e qualidade do DNA extraído) quando comparado aos outros métodos. Análise in silico de sequências que codificam os genes gltA , htrA e ompB de carrapatos associados à espécies de rickettsias revelaram ser a base para um novo método de PCR-RFLP, que permitiu a identificação diferencial de espécies de Rickettsia encontradas no Brasil. O método foi avaliado utilizando larvas e ninfas de Amblyomma longirostre, Amblyomma ovale e Amblyomma varium coletadas nas aves capturadas neste estudo. A bactéria “Candidatus Rickettsia amblyommii” foi identificada em 100% (17/17) dos A. longirostre examinados, enquanto que as outras duas espécies de carrapatos foram universalmente PCR negativas. O método básico emprega as endonucleases de restrição MspI e Rsal e pode ser realizada no decurso de um único dia de trabalho. Este oferece um meio conveniente e rentável para executar a análise em grande escala de populações de carrapatos, e deve ser um benefício para os pesquisadores que não dispõem de recursos financeiros ou técnicos necessários para a identificação baseada no sequenciamento de nucleotídeos. Em conclusão, este estudo amplia o conhecimento das relações ecológicas entre ixodídeos e a avifauna em um importante bioma da região Neotropical, com novas perspectivas no âmbito das técnicas moleculares aplicadas a inquéritos de parasitismo que envolve carrapatos parasitos de aves silvestres
Abstract: Ticks parasites of wild birds may serve as vectors of pathogens of major importance for wildlife and public health. Thus, the present study examined the prevalence and intensity of infestation of ticks captured from wild birds in three regions of the Atlantic Forest, with different levels of human impact, located in Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro, Brazil, with the objective of highlighting the possible relationship between prevalence of infestation and preservation of forest areas in the region. Collections were conducted from May 2011 to April 2012, resulting in the capture of 625 birds represented by 98 species divided into 26 families and seven orders, which equated to 14.2% of the richness of bird species in the state. A total of 17.44% (n= 109, 109/625) of the captured birds were parasitized by 458 ticks, of which 88.2% (n = 404, 404/458) were in the larval stage (LL) and 11.8% (n= 54, 54/458) in the nymphal stage. Among the ticks collected, 99% (n = 453) were represented by the genus Amblyomma: Amblyomma longirostre (LL = 345; NN = 34), Amblyomma nodosum (NN = 13), Amblyomma calcaratum (NN = 3), Amblyomma varium (NN = 2); Amblyomma coelebs (NN = 1), Amblyomma naponense (LL = 1), Amblyomma ovale (LL = 1) and Amblyomma sp. (LL = 53). The genus Haemaphysalis was represented by four larvae and a single nymph, corresponding to 1% of the ticks collected. In addition, new species of host birds were reported in Brazil, along with an unprecedented case of super infestation with larvae of A. longirostre on Xiphorhynchus guttatus. Molecular analysis (sequencing of mitochondrial 16S rDNA), provided validation of morphological identification of larvae of A. longirostre at the species level without to need to apply methods of clarification commonly used. The detection and identification of pathogens and their tick hosts are increasingly dependent upon molecular biological methods, which have as their first step the extraction of DNA from the tick and the microorganisms contained therein. In an attempt to standardize the extraction of DNA from ticks and their asscoaited microbiota, the present study compared six methods of DNA extraction (Boiling in sterile water, InstaGene®, QIAamp® DNA Mini Kit, Phenol:chloroform, Diatomaceous earth and modified Hotshot). To date, samples subjected to extraction with the kit and Phenol:chloroform have demonstarted superior results (in terms of quantity and quantity of extracted DNA), when compared to the other methods. In silico analysis of sequences encoding the gltA, htrA and ompB genes of tick associated rickettsial species provided the basis for a novel PCR-RFLP method which allowed differential identification of the Rickettsia species reported in Brazil. The method was evaluated using larvae and nymphs of Amblyomma longirostre, Amblyomma ovale and Amblyomma varium collected from birds captured in this study. The bacterium "Candidatus Rickettsia amblyommii" was identified in 100% (17/17) of A. longirostre larvae examined, while the other two species of ticks were universally PCR negative. The basic method employs the restriction endonucleases MspI and RsaI, can be performed during a single working day. It offers a convenient and cost effective means to perform large scale analysis of tick populations, and should be of benefit to researchers who lack the financial or technical resources necessary for nucleotide sequence based identification. In conclusion, this study expands the understanding of the ecological relationships between ticks and birds in a major biome of the Neotropics, with new perspectives in the context of molecular techniques applied to investigations of parasitism involving tick parasites of wild birds
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9759
Aparece en las colecciones:Doutorado em Ciências Veterinárias

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