Aplicação de técnicas independentes de cultivo na detecção de bactérias de importância agropecuária

Abstract

O conhecimento das informações genéticas bacterianas tem permitido avanços em diversas áreas do conhecimento. Esse conhecimento permite detectar microrganismos, bem como avaliar a produção de fatores de virulência e resistência em determinadas populações. Mais recentemente, o diagnóstico molecular pela detecção de fragmentos de DNA específicos desses agentes vem sendo implementado em situações onde o cultivo bacteriano não é viável ou é dificultado por condições bióticas ou abióticas. Além da detecção de agentes específicos, o conhecimento da diversidade bacteriana presente em alguns ambientes pode ser um importante critério, como, por exemplo, para avaliar a qualidade do solo. A forma mais comum de avaliar a diversidade bacteriana se dá através do cultivo. Porém, a maior parte das populações bacterianas presentes no solo não são cultiváveis, com isso, a utilização de ferramentas moleculares são cada vez mais utilizadas nesse tipo de análise. O presente estudo teve como objetivo padronizar a utilização de técnicas independentes de cultivo para atender demandas de três setores da agricultura. O primeiro capítulo padronizou a utilização da técnica de DGGE (Eletroforese em Gel de Gradiente Desnaturante) para análise da diversidade bacteriana do leite de tetos mastíticos e sadios de um mesmo animal. Os resultados apontaram para diferenças no perfil bacteriano dos dois grupos analisados. O segundo capítulo avaliou o impacto sobre a microbiota bacteriana em solos tratados com associações de cascalho de perfuração e tortas de mamona e crambe como adubos agrícolas através da análise de DGGE. A aplicação da técnica de DGGE foi eficiente na avaliação e confirmou que os tratamentos contribuíram para o aumento da diversidade bacteriana nas amostras de solos estudadas. O terceiro experimento comparou a sensibilidade da técnica de cultivo, oficial para diagnóstico da Cria Pútrida Americana (CPA), uma doença apícola causada por Paenibacillus larvae, com técnica de independente de cultivo por PCR do material extraído direto do mel. Este estudo constatou que a sensibilidade da técnica proposta foi superior à obtida pela técnica de cultivo de P. larvae. Com isso, conclui-se que as técnicas independentes de cultivo foram úteis no atendimento das demandas das questões dos setores agrícolas contemplados no estudo.