Diversidade de microrganismos no trato intestinal e resíduos digestivos de Trigoniulus corallinus (Gervais) (Diplopoda, Spirobolida, Pachybolidae)

Abstract

A crescente demanda por processos biológicos alternativos, ambientalmente favoráveis e eficientes na transformação de material ligninocelulósico, ampliando seu potencial de aplicação agroindustrial, estimula pesquisas em todo o mundo. Assim, microrganismos isolados na natureza, em ecossistemas específicos, tornam-se cada vez mais importantes pela sua diversidade metabólica e fisiológica, que lhes confere grande potencialidade no desenvolvimento de processos biotecnológicos de interesse á sociedade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a comunidade microbiana associada ao trato intestinal do diplópode Trigoniulus corallinus e a bioprospecção de microrganismos com capacidade celulolítica. Os diplópodes foram coletados e incubados em dietas com serrapilheira de grama batatais (Paspalum notatum) e sabiá (Mimosa caesalpinifolia). As amostragens aconteceram aos 15, 30, 45 e 75 dias de incubação. O trato intestinal de cinco indivíduos foi removido e seccionado o terço posterior tratado em ultrasom e estocado. Procedeu-se a extração de DNA da microbiota associada ao trato intestinal, serrapilheira e coprólito, com análise por DGGE utilizando o gene 16S rDNA, DGGE para grupo actinomicetos e avaliação da presença de genes nifH. A análise do gene 16s por DGGE revelou diversidade microbiana condicionada pela dieta oferecida até os 45 dias. Após este período o efeito não foi mais visível. A comunidade associada aos coprólitos e ao tipo de serrapilheira distribui-se em grupamentos separados das amostras oriundas do trato intestinal. O mesmo não foi observado na avaliação da comunidade de actinomicetos, onde o grande diferencial para divisão de grupos foi a dieta. Os animais alimentados com serrapilheira de grama mostraram uma comunidade diversa e não influenciada pelo tempo ou compartimentalização. As amostras associadas à serrapilheira e aos coprólitos foram 80% similares às do trato intestinal. Nos diplópodes alimentados com sabiá, o resultado foi diferente, sendo as amostras de serrapilheira e coprólitos 50% similares às do trato intestinal. Todas as amostragens tiveram genes nifH detectados via PCR. Amostras coletadas aos 45 dias foram também inoculadas em meio mineral mínimo de Busnell-Hass adicionado de carboxi-metil-celulose (CMC) como única fonte de carbono. Os microrganismos isolados foram avaliados quanto à capacidade de degradação de celulose e 15 apresentaram índice enzimático maior que 1. O isolado com o maior índice (3,65) foi alvo de outras análises. A visualização em microscópio sugeriu que não se tratava de um isolado e sim de um complexo de microrganismos atuando na degradação da celulose. Há evidencias de FBN no trato intestinal do diplópode e microrganismos proliferados em meio CMC pela boa amplificação de genes nifH e proliferação em meio com ausência de nitrogênio. A comunidade de procariotos foi influenciada pela dieta oferecida até os 45 dias e a comunidade de actinomicetos foi condicionada em função da dieta. Foram isolados microrganismos e complexos de microrganismos com capacidade celulolítica, com grande potencial para a busca de tecnologias ambientalmente sustentáveis na geração de agrobioenergia.