Atividade enzimática micelial e conidial de isolados de Metarhizium anisopliae s.l. e virulência para Rhipicephalus microplus

Abstract

Metarhizium sppné um fungo patogênico para diversos artrópodes, com utilização consolidada no controle de pragas agrícolas, sendo considerado um agente promissor no controle de carrapatos como Rhipicephalus microplus. O presente estudo avaliou características morfológicas, produção conidial, rendimento em meio de cultivo sólido (crescimento em arroz), virulência para fêmeas de R. micropluse atividades enzimáticas (proteases, Pr1, Pr2, lipases e enzimas oxidativas) de quatro isolados brasileiros de M. anisopliae sensu lato (s.l.) (IBCB 116, IBCB 383, IBCB 410 e IBCB 481). Os isolados foram crescidos em meio batata-dextrose-ágar (BDA) durante 15 dias, realizando a partir de então a quantificação conidial. O rendimento foi determinado a partir do crescimento em arroz e da pesagem da massa de conídios produzidos. Já a virulência foi avaliada a partir de acompanhamento dos parâmetros biológicos de fêmeas ingurgitadas de R. microplus após imersão em suspensões aquosas (1×107 e 1×108 conídios mL-1)de cada isolado. Para os estudos enzimáticos, extrações proteicas foram realizadas em conídios (superfície e fração intracitoplasmática) e micélios (secretado micelial e fração intracitoplasmática). Os dados paramétricos foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey e não paramétricos pelo teste de Kruskal Wallis seguido de Student-Newman-Keuls (SNK) com nível de significância de 5%. Foi observado variação na produção de conídios/cm² entre os isolados. IBCB 383 foi aquele que apresentou maior produção conidial tanto em BDA quanto em arroz, e IBCB 116 o menor produtor. Em relação à virulência, quando avaliadas a maior concentração (1×108 conídios mL-1), IBCB 481 apresentou maior percentual de controle para fêmeas de R. microplus (44%) e IBCB 116 o menor percentual (14%). Quanto às enzimas, no geral, as atividades de proteases totais, Pr1, Pr2 e lipases foram superiores nos isolados mais virulentos. Em destaque, IBCB 481, quando comparado a IBCB 116, apresentou atividade de Pr1 superior em aproximadamente 2,8 vezes na superfície conidial e 2,5 vezes para o secretado micelial, além de atividade lipolítica cerca de cinco vezes superior na fração intracitoplasmática conidial. A atividade das enzimas oxidativas apresentou variações entre os isolados, corroborando os achados de virulência, IBCB 481 exibiu as maiores atividades de superóxido desmutase, catalase e peroxidase na maioria das análises. Portanto, conclui-se que a associação de estudos morfológicos com análises de virulência e caracterizações enzimáticas são ferramentas importantes a serem utilizadas na seleção de isolados de Metarhizium anisopliae s.l., especialmente para programas visando o biocontrole do carrapatoo R. microplus.