Caracterização de α-amilase de Alphitobius diaperinus (Coleoptera, Tenebrionidae): efeito de diferentes rações de aves e dos inibidores de Phaseolus vulgaris

Abstract

CRUZ, Wellington Oliveira. Caracterização de ɑ-amilase de Alphitobius diaperinus (Coleoptera, Tenebrionidae): Efeito de Diferentes Rações de Aves e dos Inibidores de Phaseolus Vulgaris. 2011. 50 p Dissertação (Mestrado em Química, Área de Concentração Bioquímica). Instituto de Ciências Exatas, Departamento de Química, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2011. Alphitobius diaperinus, conhecido como cascudinho de cama aviária, é uma das principais pragas avícolas. Ele utiliza o substrato das aves rico em proteínas e carboidratos como fonte de alimento, colonizando toda a área de produção, encontrando um ambiente favorável para sua proliferação. Este inseto causa problemas sanitários e econômicos, afetando a saúde e o crescimento das aves e atuando também como transmissor de microrganismos tais como baactérias, protozoários e vírus. Neste trabalho foi identificada a presença de uma α-amilase no extrato bruto de larvas e adultos de Alphitobius diaperinus. Esta enzima digestiva é responsável pela degradação de amido utilizado como combustível na obtenção de energia, sendo extremamente importante para sobrevivência de muitos insetos. A α-amilase foi parcialmente purificada por precipitação em sulfato de amônio (25-75 %) em coluna cromatográfica Sephadex G (50-80), revelando em gel de poliacrilamida uma única banda com peso molecular de aproximadamente 30 KDa. Sua pureza enzimática foi confirmada através de ensaio de atividade pelo método 3,5-dinitrosalicílico alcalino (DNS), observando-se um aumento de 7.2 vezes em relação ao extrato bruto. A α-amilase ensaiada apresentou uma atividade máxima em pH 5.0 e pH 5.6 e uma temperatura de atividade ótima de 50ºC. A atividade máxima da α-amilase de A. diaperinus foi alcançada na presença de 0.02 mM de CaCl2, e inibida com o aumento da concentração deste reagente. A atividade enzimática da α-amilase de A. diaperinus, foi significativamente inibida pelo inibidor α-AIs, (inibidores tipo lectina) de Phaseolus vulgaris, sugerindo que estes podem ser utilizados como importantes ferramentas biológicas no controle e desenvolvimento de A. diaperinus através da redução da atividade digestiva destas pragas devido a atuação desses inibidores sobre a ação catalisadora de amilases, enzimas fundamentais para a digestão de amido