Isolamento e avaliação biológica de metabólitos especiais da própolis verde por cromatografia contracorrente: Seropédica, RJ

Abstract

A própolis verde, um produto apícola brasileiro amplamente reconhecido internacionalmente, destaca-se em pesquisas científicas devido às suas promissoras propriedades e benefícios medicinais, especialmente no combate ao SARS-CoV-2 e ao câncer. A importância da caracterização dos constituintes químicos bioativos presentes nessa resina elaborada pelas abelhas melíferas, não pode ser subestimada, pois sua composição química é notavelmente complexa, exigindo múltiplas etapas para o isolamento eficaz das principais substâncias. Neste contexto, a escolha de um procedimento de isolamento que diminua custos, longos períodos de execução e perdas significativas de amostra é crucial. A Cromatografia Contracorrente (CCC), uma técnica de partição líquido-líquido que se destaca por permitir a recuperação integral do analito sem a necessidade de suportes sólidos, surge como uma alternativa adequada. Desta forma, o presente estudo avaliou tanto o extrato hexânico (EHPV), quanto etanólico (EEPV) da própolis verde, com o objetivo de isolar,com maior grau de pureza, substâncias preniladas, em especial artepilina C, bacarina e culifolina. O fracionamento do EHPV envolveu dois procedimentos cromatográficos isocráticos distintos, um com modo de eluição normal e outro com eluição reversa utilizando hexano-etanol-água 4:3:1 (v/v) como sistema de solventes bifásico. Os resultados obtidos para o isolamento dos compostos no extrato hexânico mostraram-se distintos, com o modo de eluição normal promovendo maior seletividade para bacarina (89% de pureza em HPLC-PDA) e artepilina C (93% de pureza), enquanto no modo reverso o culifolina se detacou com 96% de pureza. Além disso, as substâncias isoladas foram testadas quanto à inibição da interação entre o domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína spike e o receptor da protéina ACE2 foi avaliada pelo imunoensaio LumitTM, revelando que bacarina e artepilina C exibiram significativas atividades inibitórias, com 51% e 67% de inibição, respectivamente, em concentrações de 10 μM. No que se refere ao fracionamento do EEPV, atenção específica foi dada a metodologia para o isolamento da artepilina C. Para tal, foi utilizado o sistema de solventes hexano-acetato de etila (8:2) e bicarbonato de sódio 4% aquoso (1:1) em modo de eluição reverso, resultando na obtenção da artepilina C com 82% de pureza. Estes fracionamentos foram monitorados por meio de fingerprinting em LCQTOF, estabelecendo um parâmetro eficaz para acompanhamento da separação. No âmbito do estudo fitoquímico de EEPV, substâncias como ácido anacárdico, capilartemisina , ácido p-cumárico, aromadendrina, betuletol e canferide, também foram isolados por cromatografia

contracorrente multidimensional (MDCCC), alternado-se sistemas de solventes aquosos e não- aquosos e testados in vitro em câncer de mama (linhagens MCF-7 e MDA-MD-231). A bacarina

apresentou resultados preliminares promissores sobre linhagens agressivas de câncer de mama (MDA). Deste modo, os resultados obtidos para o isolamento dos metabólitos especiais da própolis verde evidenciam o potencial da técnica de CCC, e oferecem novas perspectivas na área de produtos naturais para o isolamento de substâncias bioativas com altas purezas, para avaliação do seu potencial biológico.