Melhoria e implantação de metodologias de análise de alimentos por cromatografia líquida de alta eficiência

Abstract

A cromatografia líquida foi inventada há mais de 100 anos e, apesar de ter passado por um período de dormência, acabou por se tornar a principal ferramenta analítica da atualidade. A evolução da parte instrumental e da tecnologia de preparo de fases estacionárias vem multiplicando ainda mais as aplicações da técnica. Métodos analíticos cada vez mais sensíveis e rápidos são a principal demanda aos analistas. Na ciência de alimentos não poderia ser diferente, a cromatografia líquida é a base analítica para centenas de metodologias, como a análise de aminoácidos, carotenoides, flavonoides, contaminantes entre outras. Uma das maiores dificuldades para os analistas que fazem uso desta ferramenta é a obtenção de padrões de qualidade, muitas substâncias em alguns casos sequer estão disponíveis comercialmente ou não são estáveis o suficiente para armazenamento. O objetivo deste trabalho é implantar e aperfeiçoar métodos cromatográficos para a análise de substâncias de interesse para a ciência de alimentos em matrizes alimentícias. Além disso, desenvolver metodologia cromatográfica para a purificação destas substâncias para posterior utilização como padrões analíticos. Foram obtidas diversas substâncias puras a partir de matrizes naturais, como carotenoides, flavonoides e vitaminas. Todas com pureza acima de 90% e em quantidades suficientes para a sua caracterização e utilização como padrões analíticos. A utilização da própria cromatografia líquida em escala analítica se mostrou eficiente na obtenção destas substâncias em quantidades suficientes. Foram implantados e melhorados métodos cromatográficos para a determinação de aminoácidos, com aplicações para a quantificação da qualidade proteica de alimentos, dosagem de colágeno em carnes e a quantificação de contaminantes como a histamina. Um método para análise de isoflavonas em soja e seus derivados também foi implantado e aperfeiçoado, uma aplicação do método foi demonstrada para a detecção de fraude em carnes por adição de proteína vegetal. Diversos carotenoides foram isolados, mesmo os carotenoides minoritários, o que contribui para a correta avaliação da capacidade pró-vitamínica A dos alimentos. Cinco novas fontes de carotenoides de grande interesse para a saúde humana foram descobertas e quantificadas. Diversas metodologias, que representam um grande volume de rotina analítica, foram aperfeiçoadas com os principais objetivos de reduzir os tempos de análise, o uso de reagentes e, consequentemente, o impacto ambiental, através da menor geração de resíduos. O tempo de corrida do método cromatográfico de determinação de bixina e norbixina foi reduzido em 55%, do método de isoflavonas foi reduzido em 73% e do método de metilxantinas em 67% em relação aos métodos até então utilizados pelo Laboratório de Cromatografia Líquida da Embrapa Agroindústria de Alimentos, o que trouxe grande ganho de tempo, sensibilidade e menor geração de resíduos.