Clonagem e expressão da proteína recombinante p27 (r-p27) do vírus da leucemia felina e produção de IgY aviária contra a r-p27 para utilização em imunodiagnóstico

Abstract

O Vírus da Leucemia Felina (FeLV) é um membro da família Retroviridae, gênero Gammaretrovirus, que representa uma importante causa de morbidade e mortalidade entre os gatos domésticos. No Brasil, o acesso ao diagnóstico da Leucemia Viral Felina ainda é restrito devido ao alto custo do teste comercial disponível, que detecta o antígeno viral p27. Para utilização em imunodiagnóstico, a IgY aviária apresenta uma série de vantagens sobre os anticorpos IgG de mamíferos, como o baixo custo da técnica e manutenção dos animais, alto rendimento dos anticorpos purificados e caráter bioético. O objetivo do presente estudo foi o desenvolvimento de uma proteína de nucleocapsídeo viral p27 recombinante, a r-p27, para elicitar anticorpos aviários, visando contribuir com o imunodiagnóstico das infecções pelo FeLV no país. Esta tecnologia poderá possibilitar o acesso ao diagnóstico e a melhor compreensão dos estudos de prevalência da infecção. Para tanto, a região codificante da p27 nativa do FeLV foi amplificada, clonada e expressa em Escherichia coli, e sua reatividade contra os anticorpos para p27 nativa foi verificada com o kit comercial de imunocromatografia. A r-p27 foi inoculada em coelhos e galinhas, para produção de IgG e IgY específicas, respectivamente. Estes anticorpos foram avaliados pela técnica de imunofluorescência indireta (IFI) contra a p27 nativa, em esfregaços de sangue de animais positivos e negativos para o FeLV. Ambos os tipos de imunoglobulinas apresentaram reatividade para a p27 recombinante e nativa do FeLV. A produção de IgY para a r-p27 representou um método de alto rendimento e baixo custo, promissor para o desenvolvimento de imunodiagnóstico da Leucemia Viral Felina