Caracterização genotípica e estudo filogenético de Cryptosporidium spp. obtidos de diferentes hospedeiros

Abstract

O presente trabalho teve por objetivo caracterizar geneticamente as espécies de Cryptosporidium oriundos de vários hospedeiros, realizar o seqüenciamento e análises filogenéticas, incluindo o depósito das primeiras seqüências brasileiras de Cryptosporidium spp. de origem animal no GenBank. Foram obtidas amostras fecais contendo oocistos de Cryptosporidium de pintos, patos, codornas e porquinhos da índia comercializados num mercado municipal da cidade do Rio de Janeiro, de bezerros de uma propriedade voltada à produção leiteira localizada no mesmo município e de gatos e cães de um abrigo para animais localizado no município de Nova Iguaçu. Para as análises foi utilizado Nested-PCR do DNA extraído a partir de 200μl de solução fecal. Foi realizada RFLP dos produtos obtidos no Nested-PCR, utilizando-se as enzimas SspI e VspI, para uma identificação preliminar das espécies de Cryptosporidium presentes. As amostras de DNA foram seqüenciadas e análises filogenéticas foram conduzidas. Foram diagnosticados e sequenciados C. baileyi infectando dois patos (DQ855339 e DQ885340) e uma codorna (DQ885335) e C. melagridis infectando um pinto (DQ885341). As seqüências dos Porquinhos da Índia receberam os números de acesso DQ885337 e DQ885338, sendo que ambas as seqüências não puderam ser identificadas como espécie conhecida de Cryptosporidium, devido à grande distância genética entre elas e aquelas já depositadas no GenBank, sugerindo que se trate de um genóptipo ou espécie nova. Parasitando os gatos foi diagnosticado C. felis (DQ885336) e em um cão C. canis (DQ885334). Uma das amostras de C. parvum de bovinos foi seqüenciada, sendo depositada no GenBank sob número de acesso DQ885333. Durante as análises dos sítios de corte enzimático dos produtos da Nested-PCR do gen 18Sr DNA, a única espécie que realmente possue padrão de corte característico é C. baileyi. As demais espécies de Cryptosporidium deveriam ser submetidas à ação de outras enzimas, para um diagnóstico acurado. Nas análises filogenéticas foi observada uma distância genética maior entre C. felis e C. canis isolados no Brasil quando comparados às seqüências do GenBank. Com base nos dados apresentados pelo agrupamento filogenético, uma possível nova espécie chama a atenção à presença de espécies desconhecidas de Cryptosporidium, mesmo em animais comuns de estimação, como é o caso do Porquinho da Índia. Estas são as primeiras seqüências de C. baileyi, C. meleagridis, C. felis, C. canis e C. parvum do Brasil depositadas no GenBank.