Produção das proteínas recombinantes AM254, VirB9 e VirB10, de Anaplasma marginale e avaliação preliminar de sua antigenicidade

Abstract

Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) é uma riquetsia intraeritrocítica, responsável por ocasionar grandes perdas econômicas na pecuária bovina das regiões tropical e sub-tropical. O objetivo desse trabalho foi produzir as proteínas de membrana recombinantes AM254, VirB9 e VirB10 e avaliar sua possível antigenicidade. Os genes am254, virB9 e virB10 foram submetidos a vários procedimentos experimentais até serem ligados ao plasmídeo pET-47b(+). Após a certificação do plasmídeo recombinante (pET-47bam254, pET-47b-virB9 e pET-47bvirB10) este foi transformado em E. coli Rosetta para expressão. As proteínas recombinantes produzidas foram analisadas pelo ensaio Western blot onde foi observada a reação do anticorpo monoclonal anti-histidina contra rVirB9 (31kDa), rVirB10 (60kDa) e rAM254 (47kDa). Após a confirmação da produção das proteínas recombinantes realizou-se a padronização do ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) indireto com soros oriundos de sangue total previamente confirmados por PCR; os mesmos soros também foram testados por ELISA (rMSP1 e rMSP5). As médias das densidades ópticas (DO) dos soros positivos foram de 1,339; 1,288 e 1,240 e dos soros negativos de 0,470, 0,324 e 0,414 para AM254, VirB9 e VirB10 respectivamente com diferença significativa ao nível de 5% entre positivos e negativos para cada proteína recombinante. O estudo demonstrou que as proteínas rAM 254, rVirB9 e rVirB10 de A. marginale são reconhecidas por soros de bovinos imunizados com diferentes isolados brasileiros da riquétsia (homólogo e heterólogos), revelando o potencial antigênico dessas proteínas.