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https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/10025
Tipo do documento: | Tese |
Título: | Bactérias endofíticas do gênero Bacillus de cana-de-açúcar: Isolamento, caracterização e potencial entomopatogênico contra Telchin licus licus (Drury) (Lepidoptera:Castniidae) em laboratório |
Título(s) alternativo(s): | Endophytic bacteria of the Bacillus genus in sugarcane: Isolation, characterization and entomopathogenic potential against Telchin licus licus (Drury) (Lepidoptera: Castniidae) in laboratory |
Autor(es): | Rocha, Francine Yuriko Otsuka |
Orientador(a): | Baldani, José Ivo |
Primeiro membro da banca: | Baldani, José Ivo |
Segundo membro da banca: | Negrisoli Júnior, Aldomário Santos |
Terceiro membro da banca: | Jesus, Ederson da Conceição |
Quarto membro da banca: | Menezes, Elen de Lima Aguiar |
Quinto membro da banca: | Coelho, Márcia Reed Rodrigues |
Palavras-chave: | Controle biológico;Broca gigante;Saccharum officinarum L.;Biological control;Giant borer |
Área(s) do CNPq: | Agronomia |
Idioma: | por |
Data do documento: | 20-Fev-2020 |
Editor: | Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro |
Sigla da instituição: | UFRRJ |
Departamento: | Instituto de Agronomia |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Fitotecnia |
Citação: | ROCHA, Francine Yuriko Otsuka. Bactérias endofíticas do gênero Bacillus de cana-de-açúcar: Isolamento, caracterização e potencial entomopatogênico contra Telchin licus licus (Drury) (Lepidoptera:Castniidae) em laboratório. 2020. 102 f Tese (Doutorado em Fitotecnia) - Instituto de Agronomia, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2020. |
Resumo: | Telchin licus licus (broca gigante) é uma praga que atinge a cultura da cana-de-açúcar, podendo ocasionar perdas elevadas na produção quando incidente na área de cultivo. Essa praga possui uma maior ocorrência na região Nordeste do Brasil e seu controle é bastante difícil. O uso de bactérias do gênero Bacillus, principalmente B. thuringiensis (Bt) tem se mostrado eficiente no controle de pragas das ordens Lepidoptera, Coleoptera, Diptera, Hemiptera e Hymenoptera. Desta forma, este trabalho teve como objetivo isolar, caracterizar estirpes endofíticas do gênero Bacillus de áreas produtoras de cana-de-açúcar e avaliar o potencial entomopatogênico contra larvas da broca gigante em condições de laboratório. Para tanto foram coletadas lagartas deste inseto, colmos e raízes de cana-de-açúcar de três usinas produtoras do estado de Alagoas para o isolamento de bactérias. Todas as amostras obtidas passaram pelo processo de pasteurização por duas vezes, tendo como resultados 425 isolados bacterianos (108 do líquido do apoplasto, 48 do trato digestivo da broca gigante, 94 das raízes e 175 da região central dos entrenós). Os isolados bacterianos foram caracterizados fenotipicamente através da coloração de Gram. A característica de Gram-positiva foi evidenciada para 161 dos 425 isolados (46 Gram-positivos originários do líquido do apoplasto, 19 do trato digestivo, 50 das raízes e 46 da região central dos entrenós). A caracterização taxonômica das bactérias, utilizando o método de amplificação da região 16S RNAr, mostrou que os isolados pertenciam em sua maioria ao gênero Bacillus, seguido dos gêneros Paenibacillus, Lysinibacillus e Terribacillus. As análises filogenéticas indicaram que 11,5% dos isolados foram filogeneticamente agrupados com a espécie B. megaterium, seguido de 10,8% para a espécie B. safensis, 10% para a espécie B. cereus, 8,9% para B. oleronius, 7% para B. amyloliquefaciens e 6% dos isolados para B. pacificus. A construção da árvore filogenética utilizando o programa MEGA v.7.0, permitiu dividir os isolados bacterianos em 18 grupos. Análises das regiões BOX foram realizadas de modo a separar os grupos bacterianos e determinar o grau de diversidade entre os isolados. Genes conservados (housekeeping) e genes cry foram amplificados através da técnica de PCR, respectivamente para a identificação das espécies de Bacillus e caracterização das bactérias quanto ao tipo de toxina produzida. Os agrupamentos com os genes conservados mostraram correspondência de sete isolados (FORCN075, FORCN076, FORCN089, FORCN090, FORNC091, FORCN092 e FORCN093) com a espécie B. thuringiensis serovar berliner. A partir da amplificação dos genes cry, foram identificados seis isolados (FORCN007, FORCN012, FORCN014, FORCN087, FORCN092 e FORCN096) contendo o gene cry2. O potencial de controle das espécies bacterianas contra lagartas da broca gigante foi avaliado em bioensaios utilizando as bactérias pertencentes ao grupo das espécies filogeneticamente próximas de B. thuringiensis, B. cereus e B. wiedmanni, além das estirpes de B. thuringiensis subsp. kurstaki estirpe S76 e a estirpe comercial HD-1. As bactérias FORCN014 (isolado do líquido do apoplasto) e FORCN066 (isolado a partir de raízes) apresentaram resultados interessantes nos bioensaios realizados, já que garantiram percentual de controle de 42,9% e 57,1%, respectivamente, no bioensaio 1. No bioensaio 2 o percentual de controle foi de 37,5% (FORCN014) e 50%(FORCN066) enquanto que no bioensaio 3 ambos os isolados tiveram percentual de controle de 50% das lagartas da broca gigante. |
Abstract: | Telchin licus licus (giant borer) is a pest that affects the sugarcane crop and can cause high yield losses when incident on the crop area. This pest has a greater occurrence in the Northeast region of Brazil and its control is quite difficult. The use of bacteria of the genus Bacillus, mainly Bacillus thuringiensis (Bt) has been shown to be efficient in the control of pests of the orders Lepidoptera, Coleoptera, Diptera, Hemiptera and Hymenoptera. Thus, this work aimed to isolate and characterize endophytic strains of the Bacillus genus from sugarcane producing areas and evaluate the entomopathogenic potential against larvae of the giant borer in laboratory conditions. For this purpose, larvae of this insect, stalks and roots of sugarcane were collected from three producing areas in the State of Alagoas for the isolation of bacteria. All samples obtained were pasteurized twice, resulting in 425 bacterial isolates (108 from the apoplast fluid, 48 from the digestive tract of the giant borer, 94 from the roots and 175 from the central region of the internodes). Bacterial isolates were phenotypically characterized by Gram staining. The Gram-positive characteristic was evidenced for 161 of the 425 isolates (46 Gram-positive originating from the apoplast fluid, 19 from the digestive tract, 50 from the roots and 46 from the central region of the internodes). The taxonomic characterization of the bacteria, using the 16S RNAr region amplification method, showed that the isolates belonged mostly to the genus Bacillus, followed by the Paenibacillus, Lysinibacillus and Terribacillus genera. Phylogenetic analyzes indicated that 11.5% of the isolates were phylogenetically grouped with B. megaterium species, followed by 10.8% for B. safensis, 10% for B. cereus, 8.9% for B. oleronius, 7% for B. amyloliquefaciens and 6% of the isolates for B. pacificus. The construction of the phylogenetic tree using the MEGA v.7.0 program allowed the bacterial isolates to be clustered in 18 groups. Analyzes of the BOX regions were performed in order to separate the bacterial groups and determine the degree of diversity between the isolates. Conserved genes (housekeeping) and cry genes were amplified through the PCR technique, respectively for the identification of Bacillus species and characterization of bacteria regarding the type of toxin produced. The clusters with the conserved genes showed correspondence of seven isolates (FORCN075, FORCN076, FORCN089, FORCN090, FORNC091, FORCN092 and FORCN093) with B. thuringiensis serovar berliner. From the amplification of the cry genes, six isolates (FORCN007, FORCN012, FORCN014, FORCN087, FORCN092 and FORCN096) were identified containing the cry2 gene. The potential of control of bacterial species against larvae of the giant borer was evaluated in bioassays using bacteria belonging to the group of species phylogenetically close to B. thuringiensis, B. cereus and B. wiedmanni, in addition to the strains of B. thuringiensis subsp. kurstaki strain S76 and the commercial strain HD-1. The bacteria FORCN014 (isolated from apoplast fluid) and FORCN066 (isolated from roots) showed interesting results in the bioassays performed, since they guaranteed a control percentage of 42.9% and 57.1%, respectively, in bioassay 1. In the bioassay 2 the control percentage was 37.5% (FORCN014) and 50% (FORCN066) and in bioassay 3 both isolates showed a control percentage of 50% of the giant borer larvae. |
URI: | https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/10025 |
Aparece nas coleções: | Doutorado em Fitotecnia |
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