Desenvolvimento de método de quantificação de aflatoxinas em amendoim por UPLC-MS (ESI/QToF) e parâmetros de validação

Abstract

As aflatoxinas são atualmente as micotoxinas mais estudadas no mundo. São classificadas pela Organização Mundial da Saúde como carcinogênicas para humanos e sua ingestão causa diversos danos à saúde, variando de toxicidades agudas com lesões de fígado ao carcinoma hepatocelular. Muitos países já possuem regulamentação quanto a estes contaminantes e a União Européia (UE) é uma das comunidades mais críticas em relação à legislação das micotoxinas com foco na inocuidade alimentar. Possui uma rígida legislação não apenas em relação aos limites máximos permitidos de aflatoxinas em alimentos, mas também em relação à qualidade dos métodos analíticos utilizados para medir tais contaminantes. No Brasil, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) publicou a resolução RDC Nº 7 de 18 de fevereiro de 2011, dispondo sobre limites máximos tolerados de micotoxinas em alimentos. Essa resolução fixa novos limites para aflatoxinas, além de ocratoxina A, desoxinivalenol, fumonisinas, patulina e zearalenona em matérias primas e alimentos prontos para consumo, estabelecendo metas para que a cada 2 anos os limites dessas toxinas sejam cada vez menores, tendendo a uma maior rigidez, assim como a UE. Para que essas metas possam ser cumpridas são necessárias metodologias analíticas de maior sensibilidade, seletividade e exatidão. Desta forma o presente trabalho visou desenvolver um método analítico e avaliar os parâmetros de validação necessários para determinação de aflatoxinas em amendoim. Utilizou-se cromatografia líquida de ultra eficiência e detecção por espectrometria de massas (UPLC-MS) de alta resolução, metodologia equiparada aos padrões de qualidade analítica da UE. No método desenvolvido obteve-se de 3 a 7 fragmentos para cada aflatoxina permitindo a análise qualitativa inequívoca das AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2 em amendoim e cumpriu-se com os mais rigorosos critérios analíticos cromatográficos estabelecidos pela UE. O método apresentou uma corrida cromatográfica de 5 minutos e menor gasto de solventes orgânicos quando comparado à técnica de HPLC. Os limites de detecção alcançados foram de 1,6; 0,396; 1,608 e 1,396 µg/kg µg/kgµg/kgµg/kg para as AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2, respectivamente, e foram obtidas curvas de calibração com boa linearidade entre os valores de 1,6 a 12,0 μg/kg (AFB1 e AFG1) e 0,396 a 2,97 μg/kg (AFB2 e AFG2). Foram analisadas 10 amostras de amendoim adquiridas em feira livre do Rio de Janeiro e identificados traços das aflatoxinas B1, B2 e G2 em duas delas