Preparo de padrões analíticos, estudo de estabilidade e parâmetros de validação para ensaio de carotenóides por cromatografia líquida

Abstract

A vitamina A é essencial aos seres humanos sendo ingerida através de alimentos de origem animal como carnes e ovos, ou obtida através da conversão dos carotenóides pró-vitamínicos presentes principalmente em frutas e vegetais. A deficiência de vitamina A (retinol) é o maior problema nutricional em populações subdesenvolvidas e suas conseqüências são a xeroftalmia, cegueira e morte prematura, especialmente em crianças. A vitamina A é também importante na manutenção do crescimento, na eficiência reprodutiva, na manutenção dos tecidos epiteliais e na prevenção de queratinização, além de apresentar uma importante ação na resposta imunológica. A ingestão deficiente de vitamina A, especialmente em populações de países subdesenvolvidos ou populações pobres de países desenvolvidos, é o maior problema nutricional da atualidade. Cerca de 4,4 milhões de crianças em idade pré-escolar apresentam danos à visão devido à deficiência desta vitamina e anualmente 250 a 500 mil dessas crianças acabam cegas. Os carotenóides são a fonte de retinol mais importante em populações onde a ingestão dessa vitamina é baixa. Desta maneira, a sua correta análise, tanto qualitativa quanto quantitativa, em alimentos é muito importante. Neste trabalho, desenvolveu-se uma metodologia cromatográfica específica para a separação dos carotenóides e seus isômeros. Este estudo propôs a otimização da separação cromatográfica dos principais carotenóides encontrados em alimentos e a posterior validação do método implantado. Para isto foi necessário o isolamento dos padrões desses carotenóides em quantidades e purezas suficientes. Uma avaliação da estabilidade dos padrões preparados foi realizada para determinar as melhores condições de armazenamento, assim como o período máximo de armazenamento. O isolamento dos padrões deu-se por cromatografia aberta com posterior quantificação espectrofotométrica e determinação da pureza através de CLAE. Avaliaram-se diversas matrizes naturais como fonte dos carotenóides de interesse e foram descobertas novas matrizes com características melhores que as usuais para o isolamento desses padrões, produzindo padrões com purezas cromatográficas superiores à exigência mínima de 90%. O estudo de estabilidade mostrou que é possível o armazenamento dos padrões, em misturas multi padrões prontas para o uso para calibração cromatográfica externa, por mais de 370 dias. A validação mostrou que o método implantado e otimizado é seletivo, sensível, linear e a faixa de trabalho para a análise dos carotenóides em amostras de alimentos foi estabelecida em 0,5 a 8,0μg/mL para cada carotenóide.