Detecção e diferenciação de carnes de espécies de açougue por pcr em tempo real multiplex e análise de “High Resolution Melting”

Abstract

As fraudes intencionais ou incidentais em carnes e produtos cárneos pela substituição de espécies de animais de açougue, ocorrem de forma recorrente, constituindo-se como uma preocupação premente de entidades governamentais voltadas para a garantia da qualidade de alimentos e direitos do consumidor. Esta prática pode causar prejuízos econômicos além de elevado impacto negativo para a indústria produtora de alimentos e para os consumidores, seja por questões, morais, éticas, religiosas ou relacionadas à saúde pública. O desenvolvimento de novas tecnologias permitiu aos estabelecimentos industriais a criação de produtos mais elaborados, diversificados e com características cada vez mais complexas. Diversos métodos analíticos vêm sendo desenvolvidos, com a intenção de detectar fraudes pela substituição de tipos de carne de uma espécie animal por outra de menor valor auxiliando no reconhecimento da autenticidade dos produtos cárneos. O presente trabalho teve como objetivo padronizar uma Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) Multiplex e “High Resolution Melting” (HRM) para detectar e diferenciar tipos de carnes de animais de açougue e derivados. A reação singleplex da espécie Gallus gallus apresentou limite de detecção dez cópias do genoma, com um coeficiente de determinação (R²) de 0,991 e uma eficiência de 105%. A reação da espécie Sus scrofa apresentou um limite de detecção de 1 cópia, com R² 0,999 e eficiência de 105%. As reações das espécies Equus caballus e Bos indicus apresentaram limite de detecção de uma cópia do genoma, R² de 0,999 e 0,996 e eficiência de 98% e 94,8%, respectivamente. Os resultados obtidos demonstraram que as reações singleplex, foram específicas, sensíveis e aplicáveis na identificação de espécies animais em produtos cárneos. A reação multiplex pode ser utilizada para detecção e identificação de diferentes espécies de animais de açougue em uma única reação.