Avaliação do efeito do 17β-estradiol sobre a expressão gênica da conexina40 e suas implicações na propagação da atividade elétrica cardíaca

Abstract

O 17β-estradiol (E2), regula muitos genes cardíacos através de seu receptor (receptor para estrógeno, RE). A propagação da atividade elétrica no miocárdio depende da transferência de corrente através das junções comunicantes. As conexinas 40 (Cx40) e 43 são as principais conexinas que formam as junções expressas no coração. Em camundongos, a Cx40 é restrita ao átrio e sistema de condução. Alterações na expressão ou atividade da Cx40 estão associadas a fibrilação atrial. Aqui nós avaliamos o efeito do E2 in vitro e in vivo sobre a expressão do RNAm da Cx40 nos átrios e correlacionamos aos estudos eletrocardiográficos (ECG). Nós tratamos a linhagem A7r5 (derivada de músculo liso aórtico de rato embrionário) com alta e baixa concentrações de benzoato de estradiol, BE, (10-6 M e 10-8 M) durante 24 horas e cultura primária de cardiomiócitos atriais de ratos neonatos foram incubados com BE 10-6 M durante 2, 4 e 8 horas. Ensaios de transfecção transiente foram realizados na linhagem A7r5 com um plasmídeo contendo um segmento da região promotora da Cx40 (-1190/+121Cx40LucpGL3) e tratadas com 10-6 M de BE durante 24 horas. Camundongos fêmeas foram ovariectomizadas (OVX) e então tratadas com baixa (2 microgramas) e alta (20 microgramas) doses de benzoato de estradiol (OVX+BE2 e OVX+BE20) durante 15 dias, sendo que o grupo controle sofreu apenas estresse cirúrgico (FO). Foram realizados registros ECG e a expressão atrial do RNAm da Cx40 foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Nós observamos que altas doses de BE diminui a expressão do RNAm da Cx40 in vitro (na linhagem A7r5 e na cultura de cardiomiócitos). A atividade transcricional do promotor foi inibida por BE10-6 M. Nós observamos diminuição da frequência cardíaca dos animais do grupo OVX em relação ao controle, grupo FO. Nenhuma diferença foi observada na frequência cardíaca entre os grupos OVX+BE2 e OVX+BE20. Os animais do grupo OVX apresentaram diminuição na duração da onda P em relação ao grupo FO, no entanto nenhuma diferença foi observada na duração da onda P entre os outros grupos. Nenhuma diferença foi observada nos outros intervalos eletrocardiográficos entre os grupos experimentais. A expressão atrial do RNAm da Cx40 estava reduzida nos animais do grupo OVX+BE20 em relação ao grupo FO. Nossos dados demonstram que altas doses de benzoato de estradiol reduzem a expressão do RNAm da Cx40 in vitro e em camundongos ovariectomizados. Nós propomos que altas doses de E2 ativa o seu receptor, e o complexo RE-E2 age diretamente no DNA, inibindo a atividade transcricional do promotor da Cx40