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Tipo do documento: Dissertação
Título: Avaliação do efeito do 17β-estradiol sobre a expressão gênica da conexina40 e suas implicações na propagação da atividade elétrica cardíaca
Título(s) alternativo(s): Evaluation of the effect of 17 β-estradiol on the gene expression of Connexin40 and its implications for the spread of cardiac electrical activity.
Autor(es): Amarante, Débora Barbosa
Orientador(a): Almeida, Norma Aparecida dos Santos
Primeiro membro da banca: Fortes, Fabio da Silva de Azevedo
Segundo membro da banca: Oliveira, Elaine de
Palavras-chave: Connexin40 mRNA;estradiol benzoate;RNAm da Conexina40;benzoato de estradiol;ECG;coração e camundongo;ECG;heart and mouse
Área(s) do CNPq: Fisiologia
Idioma: por
Data do documento: 26-Fev-2016
Editor: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas
Citação: AMARANTE, D. B. Avaliação do efeito do 17β-estradiol sobre a expressão gênica da conexina40 e suas implicações na propagação da atividade elétrica cardíaca. 2016. 48 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Fisiológica) - Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica-RJ, 2016 .
Resumo: O 17β-estradiol (E2), regula muitos genes cardíacos através de seu receptor (receptor para estrógeno, RE). A propagação da atividade elétrica no miocárdio depende da transferência de corrente através das junções comunicantes. As conexinas 40 (Cx40) e 43 são as principais conexinas que formam as junções expressas no coração. Em camundongos, a Cx40 é restrita ao átrio e sistema de condução. Alterações na expressão ou atividade da Cx40 estão associadas a fibrilação atrial. Aqui nós avaliamos o efeito do E2 in vitro e in vivo sobre a expressão do RNAm da Cx40 nos átrios e correlacionamos aos estudos eletrocardiográficos (ECG). Nós tratamos a linhagem A7r5 (derivada de músculo liso aórtico de rato embrionário) com alta e baixa concentrações de benzoato de estradiol, BE, (10-6 M e 10-8 M) durante 24 horas e cultura primária de cardiomiócitos atriais de ratos neonatos foram incubados com BE 10-6 M durante 2, 4 e 8 horas. Ensaios de transfecção transiente foram realizados na linhagem A7r5 com um plasmídeo contendo um segmento da região promotora da Cx40 (-1190/+121Cx40LucpGL3) e tratadas com 10-6 M de BE durante 24 horas. Camundongos fêmeas foram ovariectomizadas (OVX) e então tratadas com baixa (2 microgramas) e alta (20 microgramas) doses de benzoato de estradiol (OVX+BE2 e OVX+BE20) durante 15 dias, sendo que o grupo controle sofreu apenas estresse cirúrgico (FO). Foram realizados registros ECG e a expressão atrial do RNAm da Cx40 foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Nós observamos que altas doses de BE diminui a expressão do RNAm da Cx40 in vitro (na linhagem A7r5 e na cultura de cardiomiócitos). A atividade transcricional do promotor foi inibida por BE10-6 M. Nós observamos diminuição da frequência cardíaca dos animais do grupo OVX em relação ao controle, grupo FO. Nenhuma diferença foi observada na frequência cardíaca entre os grupos OVX+BE2 e OVX+BE20. Os animais do grupo OVX apresentaram diminuição na duração da onda P em relação ao grupo FO, no entanto nenhuma diferença foi observada na duração da onda P entre os outros grupos. Nenhuma diferença foi observada nos outros intervalos eletrocardiográficos entre os grupos experimentais. A expressão atrial do RNAm da Cx40 estava reduzida nos animais do grupo OVX+BE20 em relação ao grupo FO. Nossos dados demonstram que altas doses de benzoato de estradiol reduzem a expressão do RNAm da Cx40 in vitro e em camundongos ovariectomizados. Nós propomos que altas doses de E2 ativa o seu receptor, e o complexo RE-E2 age diretamente no DNA, inibindo a atividade transcricional do promotor da Cx40
Abstract: The 17β-estradiol (E2) regulate many cardiac genes via its estrogen receptor (ER). The propagation of electrical activity in the myocardium depends on the current transfer at gap junctions. Connexins 40 (Cx40) and 43 are the predominant junctional proteins. In mice, Cx40 is restricted to the atrium and conduction system. Alterations of Cx40 expression or activity are associated with atrial fibrillation. Here we evaluate the effect of the E2 onCx40 mRNA expression, in vitro, and in vivo the effect on atrium expression of Cx40 mRNA in correlation to ECG studies. We treated A7r5 cells (smooth muscle cells from rat thoracic aorta) with low and high doses ofestradiol benzoate, EB, (10-8 M and 10-6M) for 24h and rat neonatal cardiomyocytes with EB 10-6 M for 2, 4 and8 hours. A7r5 cells were trasiently transfected with 0.5 microgramas of the test plasmid (-1190/+121Cx40Luc pGL3) and treated with 10-6M of EB for 24 hours. Female mice were subjected to ovariectomy (OVX) and then, treated with a low (2g) and a high dose (20g) of estradiol benzoate (EB; OVX+EB2 and OVX+EB20) for 15 days. ECG recordings were obtained from mice and atrium Cx40 mRNA expression were evaluated by RT-PCR real time. First, we observed that high doses of EB down regulated Cx40 mRNA in vitro (A7r5 cells and rat atrial cardiomyocytes). The transcriptional activity of Cx40 promoter was inhibited by 10-6M of EB in A7r5 cells. We observed lower heart rate for OVX animals when to compared to control animals, FO. In this regard, no difference was observed between OVX+EB2 and OVX+BE20 heart rate. The OVX group showed decrease P wave duration when to compared to FO group, but no difference in the P wave duration was observed among the others groups. No difference was observed in another ECG intervals among the experimental groups. The atrial Cx40mRNA level was reduced in OVX+BE20group when to compared to FO group. Our data indicate, for the first time, high doses of estradiol benzoate reduce Cx40 mRNA in vitro and ovariectomized mice. We proposed that when E2 levels are high, the complex ER-E2 acts directly from the DNA, inhibiting the transcriptional activity of Cx40 promoter
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11402
Aparece nas coleções:Mestrado em Ciências Fisiológicas

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