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Tipo do documento: Dissertação
Título: Detecção de Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado através de isolamento e reação em cadeia da polimerase
Otros títulos: Tritrichomonas foetus detection in cryopreserved bovine semen by Isolation and polymerase chain reaction
Autor: Ribeiro, Laura
Orientador(a): Jesus, Vera Lucia Teixeira de
Primeiro membro da banca: Jesus, Vera Lúcia Teixeira de
Segundo membro da banca: Mendes, Marcia Cristina
Terceiro membro da banca: Brito, Marilene de Farias
Palabras clave: Tricomoníase;biologia molecular;sêmen congelado;Trichomoniasis;molecular biology;frozen semen
Área(s) do CNPq: Medicina Veterinária
Idioma: por
Fecha de publicación: 15-dic-2020
Editorial: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária (Patologia e Ciências Clínicas)
Citación: RIBEIRO, Laura. Detecção de Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado através de isolamento e reação em cadeia da polimerase. 2020. 42 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária, Patologia e Ciências Clínicas) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2020.
Resumen: A Tricomonose Genital Bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo protozoário flagelado Tritrichomonas foetus, transmitida por via venérea e por fômites contaminados, possui grande importância econômica, pois sua principal consequência é o aborto no terço inicial da gestação, além de produzir infertilidade temporária. Em machos a doença é assintomática e permanente, caracterizando os touros como portadores silenciosos e ressaltando o direcionamento do diagnóstico nesta categoria de animais. A identificação e detecção do protozoário por meio de cultivo são tidas como “padrão ouro” dentre as técnicas diagnósticas nas centrais de inseminação artificial brasileiras. Entretanto, há a possibilidade de resultado falso negativo, sendo necessário o desenvolvimento de técnicas mais sensíveis e eficazes de diagnóstico já que, até o momento, a Inseminação Artificial (IA) é a principal forma de prevenção da TGB. T. foetus já foi encontrado em amostras de sêmen e também é capaz de permanecer viável quando congelado, o que eleva a IA a um potencial fator de risco quando medidas sanitárias não são aplicadas ou o método diagnóstico é insuficiente. Com base no exposto, este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino congelado, por meio de cultivo e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Uma vez no laboratório, as amostras foram descongeladas em água a 37ºC, parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliadas a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para posterior análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o Kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras, respaldando o resultado obtido no cultivo. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno pesquisado em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen comercial testado.
Abstract: The Bovine Genital Trichomoniasis (BGT) is an infectious disease triggered by a protozoan called Tritrichomonas foetus, which is transmitted by venereal route and by contaminated fomites. The disease is economically relevant, since its main consequence is abortion, besides producing temporary infertility. In males the disease is asymptomatic and permanent, characterizing the bulls as silent nurses and emphasizing the direction of diagnosis in this category of animals. The identification and detection of the protozoan by microbiological culture are considered as "gold standard" among diagnostic techniques in Brazilian artificial insemination centers. However, the possibility of a false negative is a reality and is needed more sensitive and specific techniques of diagnose, since the Artificial Insemination (AI) is the current way to prevent BGT. T. foetus has already been found in semen samples and is also able to remain viable when frozen, raising AI to a risk factor when sanitary measures are not applied or the diagnostic method is insufficient Thus, this study is aimed to detect the presence of T. foetus in samples of cryopreserved bovine semen, through culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). The semen straws will be purchased from artificial insemination centers. A total of 27 samples were analyzed. Once in the laboratory, they were thawed in water at 37ºC, part was inoculated in a test tube containing Diamond medium, incubated at 35ºC with consequent growth evaluation and evaluated every 24 hours via direct microscope examination and the other part diluted in PBS for subsequent molecular analysis. After 10 days of cultivation, all samples were negative. For molecular detection, the Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. The PCR result was negative for all samples, corroborating with that obtained in the culture. It was concluded that the samples used were negative for the presence of T. foetus in both diagnostic methods, proving the innocuousness of the commercial semen tested.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/14147
Aparece en las colecciones:Mestrado em Medicina Veterinária (Patologia e Ciências Clínicas)

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