Detecção de Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado através de isolamento e reação em cadeia da polimerase

Abstract

A Tricomonose Genital Bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo protozoário flagelado Tritrichomonas foetus, transmitida por via venérea e por fômites contaminados, possui grande importância econômica, pois sua principal consequência é o aborto no terço inicial da gestação, além de produzir infertilidade temporária. Em machos a doença é assintomática e permanente, caracterizando os touros como portadores silenciosos e ressaltando o direcionamento do diagnóstico nesta categoria de animais. A identificação e detecção do protozoário por meio de cultivo são tidas como “padrão ouro” dentre as técnicas diagnósticas nas centrais de inseminação artificial brasileiras. Entretanto, há a possibilidade de resultado falso negativo, sendo necessário o desenvolvimento de técnicas mais sensíveis e eficazes de diagnóstico já que, até o momento, a Inseminação Artificial (IA) é a principal forma de prevenção da TGB. T. foetus já foi encontrado em amostras de sêmen e também é capaz de permanecer viável quando congelado, o que eleva a IA a um potencial fator de risco quando medidas sanitárias não são aplicadas ou o método diagnóstico é insuficiente. Com base no exposto, este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino congelado, por meio de cultivo e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Uma vez no laboratório, as amostras foram descongeladas em água a 37ºC, parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliadas a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para posterior análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o Kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras, respaldando o resultado obtido no cultivo. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno pesquisado em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen comercial testado.