Biologia, diagnóstico morfológico e molecular da infecção experimental e natural de Babesia equi (Laveran, 1901) em Boophilus microplus (Canestrini, 1887)

Abstract

Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção natural e experimental de Babesia equi em ninfas e adultos de Boophilus microplus por meio de microscopia óptica e análise molecular. A infecção experimental foi observada a partir de ninfas, machos, fêmeas, ovos e larvas não alimentadas de B. microplus alimentados em equinos com infecção crônica por B. equi. Para a realização do experimento foram utilizados dois eqüinos, mestiços, com infecção por B. equi. Os animais foram infestados com larvas de B. microplus de geração F4 obtidas de colônia mantida em laboratório e livres de infecção por Babesia spp. A partir da ecdise para ninfa foram realizadas coletas diárias. Após a coleta foram realizados os exames de hemolinfa e extração do intestino e das glândulas salivares os quais foram macerados em lâminas de vidro para microscopia, fixados em metanol e corados com Giemsa. As glândulas salivares dissecadas foram divididas em duas partes. A primeira parte foi macerada em lâminas de vidro para microscopia, corada com corante Giemsa e observada em microscópio ótico para análise morfológica. A segunda parte foi realizada a extração de DNA, sendo submetida a PCR com primers especifícos para o gene 18S rRNA para B. equi. Foram dissecados 860 espécimes (ninfas= 432; fêmeas= 280 e machos= 148). Na microscopia óptica foi possível observar nas hemolinfas das ninfas a presença de cinetos com aspecto claviforme típicos do gênero Babesia. Nas glândulas salivares, a morfologia e a seqüência dos estágios de desenvolvimento de B. equi das ninfa s de B. microplus, foram observadas a partir do 4º dia após ecdise, sendo possível observar nos ácinos celulares a formação de esporoblastos e de esporozoítas ovóides medindo 1,5 μm de diâmetro e alongados medindo 3,8 a 5,2μm de comprimento e 0,8 a 1,5μm de largura. A reação em cadeia de polimerase (PCR) confirmou a presença de B. equi em DNA de glândulas salivares extraídas de ninfas, machos, fêmeas, assim como dos ovos e larva. A infecção natural foi observada a partir de ninfas e adultos de B. microplus coletados de dois eqüinos naturalmente infestados e comprovadamente infectados por B. equi, procedentes do município de Seropédica, Rio de Janeiro. Foram dissecados 324 espécimes (ninfas= 145, fêmeas= 138 e machos= 41). O processamento das glândulas salivares dissecadas foi semelhante ao descrito para infecção experimental. Das glândulas salivares submetidas a PCR, 70% apresentaram resultados positivos para B. equi. As análises por microscopia óptica das glândulas salivares das ninfas e dos adultos revelaram a presença nos ácinos celulares os estágios de esporoblastos e o desenvolvimento de esporozoítas alongados. As análises morfológicas, morfométricas e moleculares confirmaram a infecção experimental e natural das glândulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus por B. equi. Os resultados deste estudo demonstram a capacidade de multiplicação de B. equi em glândulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus. A detecção de DNA de B. equi em ovos e larvas de B. microplus também sugere a possibilidade da transmissão transovariana nesta espécie de carrapato. Estes resultados sugerem que o carrapato B. microplus é vetor biológico de B. equi na região estudada.