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Tipo do documento: Tese
Título: Biologia, diagnóstico morfológico e molecular da infecção experimental e natural de Babesia equi (Laveran, 1901) em Boophilus microplus (Canestrini, 1887)
Otros títulos: Biology, morphologic and molecular diagnosis of the experimental and natural infection of Babesia equi (Laveran, 1901) in Boophilus microplus (Canestrini, 1887)
Autor: Fernandes, Kátia Roberta
Orientador(a): Massard, Carlos Luiz
Primeiro coorientador: Almeida, Fernando Queiroz
Segundo coorientador: Barreira, Jairo Dias
Palabras clave: Theileria equi;eqüino;babesiose eqüina;reação em cadeia de polimerase;esporogonia;glândula salivar;vetor;equine babesiosis;horse;polymerase chain;reaction;sporogony;salivary glands;vector
Área(s) do CNPq: Parasitologia
Idioma: por
Fecha de publicación: 26-feb-2007
Editorial: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UFRRJ
Departamento: Instituto de Veterinária
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
Citación: FERNANDES, Kátia Roberta. Biologia, diagnóstico morfológico e molecular da infecção experimental e natural de Babesia equi (Laveran, 1901) em Boophilus microplus (Canestrini, 1887). 2007. 59 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica - RJ, 2007.
Resumen: Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção natural e experimental de Babesia equi em ninfas e adultos de Boophilus microplus por meio de microscopia óptica e análise molecular. A infecção experimental foi observada a partir de ninfas, machos, fêmeas, ovos e larvas não alimentadas de B. microplus alimentados em equinos com infecção crônica por B. equi. Para a realização do experimento foram utilizados dois eqüinos, mestiços, com infecção por B. equi. Os animais foram infestados com larvas de B. microplus de geração F4 obtidas de colônia mantida em laboratório e livres de infecção por Babesia spp. A partir da ecdise para ninfa foram realizadas coletas diárias. Após a coleta foram realizados os exames de hemolinfa e extração do intestino e das glândulas salivares os quais foram macerados em lâminas de vidro para microscopia, fixados em metanol e corados com Giemsa. As glândulas salivares dissecadas foram divididas em duas partes. A primeira parte foi macerada em lâminas de vidro para microscopia, corada com corante Giemsa e observada em microscópio ótico para análise morfológica. A segunda parte foi realizada a extração de DNA, sendo submetida a PCR com primers especifícos para o gene 18S rRNA para B. equi. Foram dissecados 860 espécimes (ninfas= 432; fêmeas= 280 e machos= 148). Na microscopia óptica foi possível observar nas hemolinfas das ninfas a presença de cinetos com aspecto claviforme típicos do gênero Babesia. Nas glândulas salivares, a morfologia e a seqüência dos estágios de desenvolvimento de B. equi das ninfa s de B. microplus, foram observadas a partir do 4º dia após ecdise, sendo possível observar nos ácinos celulares a formação de esporoblastos e de esporozoítas ovóides medindo 1,5 μm de diâmetro e alongados medindo 3,8 a 5,2μm de comprimento e 0,8 a 1,5μm de largura. A reação em cadeia de polimerase (PCR) confirmou a presença de B. equi em DNA de glândulas salivares extraídas de ninfas, machos, fêmeas, assim como dos ovos e larva. A infecção natural foi observada a partir de ninfas e adultos de B. microplus coletados de dois eqüinos naturalmente infestados e comprovadamente infectados por B. equi, procedentes do município de Seropédica, Rio de Janeiro. Foram dissecados 324 espécimes (ninfas= 145, fêmeas= 138 e machos= 41). O processamento das glândulas salivares dissecadas foi semelhante ao descrito para infecção experimental. Das glândulas salivares submetidas a PCR, 70% apresentaram resultados positivos para B. equi. As análises por microscopia óptica das glândulas salivares das ninfas e dos adultos revelaram a presença nos ácinos celulares os estágios de esporoblastos e o desenvolvimento de esporozoítas alongados. As análises morfológicas, morfométricas e moleculares confirmaram a infecção experimental e natural das glândulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus por B. equi. Os resultados deste estudo demonstram a capacidade de multiplicação de B. equi em glândulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus. A detecção de DNA de B. equi em ovos e larvas de B. microplus também sugere a possibilidade da transmissão transovariana nesta espécie de carrapato. Estes resultados sugerem que o carrapato B. microplus é vetor biológico de B. equi na região estudada.
Abstract: The aim of the present study was to evaluate the natural and experimental infection of B. equi in nymphs and adult Boophilus microplus using optical microscopy and molecular analysis. The experimental infection was observed in nymphs, males and females of B. microplus fed on equines chronically infected with B. equi and in non fed larvae and eggs. For the experiments two equines, of not defined breed, proven to be infected with B. equi were used. The animals were infested with B. microplus larvae of generation F4 obtained from a laboratory maintained population, known to be free of Babesia spp. infection. Daily collections of ticks were realized using as starting point the ecdisys to nymph state. After the collection the hemolymph was examined and the intestine and salivary glands were dissected, smashed on glass slides for microscopy, methanol treated and stained with Giemsa. There were dissected 860 specimens (432 nymphs, 280 females and 148 males). The dissected salivary glands were divided into two parts. The first one was smashed on microscopy glass slides, stained and examined by optical microscopy for morphologic analyses. From the second part was realized DNA extraction and PCR with specific primers for the 18S rRNA. On optical microscopy of nymph hemolymph was possible to be observed the presence of kinetes with claviform aspect characteristic for the genus Babesia. In the salivary glands of B. microplus nymphs the morphology and the sequence of developmental stages of B. equi were observed initiating on day 4 after ecdysis, being possible to see in acinary cells the formation of sporoblasts and ovoid sporozoites measuring 1.5 μm of diameter and elongated sporozoites with 3.8 to 5.2μm of length and 0.8 to 1.5 μm of width. The PCR confirmed the presence of B. equi in DNA samples extracted from salivary glands of nymphs, male and female ticks as well as in larvae and eggs. To evaluate the natural infection were collected nymphs and adult B. microplus from two equines naturally infested by these ticks and naturally infected with B. equi. These horses were originated from Seropedica city in the state of Rio de Janeiro. There were dissected 324 specimens (145 nymphs, 138 females and 41 males). The proceedings with the salivary glands were identical to the previously described for the experimental infection. Of the salivary glands submitted to PCR, 70% showed to be infected with B. equi. Microscopical analysis of the salivary glands revealed the presence of sporoblast stages and the development of elongated sporozoites in acinary glands. The morphologic, morphometric and molecular analysis confirmed the experimental and natural infection of the salivary glands of nymphs and adult B. microplus with B. equi. The results of the present study show the ability of B. equi to develop in this tick species. The detection of B. equi DNA in eggs and larvae also suggests the possibility of transovarian transmission in B. microplus. The results allow to consider the tick B. microplus as a potential biologic vector of B. equi in horses from the studied region.
URI: https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9637
Aparece en las colecciones:Doutorado em Ciências Veterinárias

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